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wkl1984金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
ＲＴ－ＰＣＲ問(wèn)題求助
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做反轉(zhuǎn)錄，按照生工的AMV一步反轉(zhuǎn)錄試劑盒的具體內(nèi)容操作，但是試劑盒不建議用隨機(jī)六聚體引物擴(kuò)增，我正好用隨機(jī)六聚體引物擴(kuò)增了，擴(kuò)增的結(jié)果如下，1為1000kb的marker，2 為ＲＴ－ＰＣＲ產(chǎn)物，marker好像有問(wèn)題。擴(kuò)增條件為 預(yù)變性45° 30min,PCR擴(kuò)增94° 15s ,60° 30s,72° 1min,40個(gè)循環(huán)，終延伸為72°1min。另外，模板ＤＮＡ的量加了3微升，總模板DNA小余1微克。其余按照試劑盒操作。特異性差一點(diǎn)，請(qǐng)大家給出建議 |
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wkl1984
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wkl1984
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5樓2011-05-01 10:46:42
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