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qiang7金蟲 (小有名氣)
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[求助]
Western Blot電泳蛋白質(zhì)外漏問題求助
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求助各位高手指點，本人最近蛋白電泳過程中經(jīng)常出現(xiàn)在蛋白樣品剛跑離樣品孔還沒進入分離膠的時候，樣品就漏下來了！如下圖所示。在我想的問題都找遍了，比如濃縮膠濃縮時間，玻璃板清洗問題及玻璃板都換新的了，還有試劑都換了一套，還是漏 真不知道還有什么致命因素沒有找到，請各位大俠指點！小弟將不勝感激！ |
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 蛋白質(zhì)生物學實驗經(jīng)驗 | 核酸生物學實驗經(jīng)驗 | 蛋白電泳 漏樣 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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qiang7(金幣+2): 您說的這些都注意到了 2011-05-22 10:47:35
adslye(金幣+1): 鼓勵交流~祝順利！ 2011-09-26 09:11:43
qiang7(金幣+2): 您說的這些都注意到了 2011-05-22 10:47:35
adslye(金幣+1): 鼓勵交流~祝順利！ 2011-09-26 09:11:43
| 這個問題我也遇到過，后來解決了。首先分離膠水封或者異丙醇封得時候不能干，也就是說分離膠和濃縮膠之間的界面不能干，這兩個界面很容易有空隙，進入空氣一般就會漏孔。再有就是梳子是不是太緊？梳子太緊容易造成拔梳子的時候?qū)饪s膠帶起來，和分離膠分離了有空隙。再有就是玻板是不是新的？新的上面有一層油，要洗干凈，否則，膠和板之間容易不緊，造成漏膠。我認為試劑應(yīng)該沒有太大問題，如果是一直使用的試劑。檢查一下細節(jié)問題吧。 |
7樓2011-05-21 23:23:13
qiang7
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2樓2011-05-18 10:34:23
xuguanghai
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【答案】應(yīng)助回帖
★
qiang7(金幣+1): 濃縮膠都濃縮了近1h了 還有沒有什么關(guān)鍵因素�。� 2011-05-18 11:11:22
adslye(金幣+1): 鼓勵交流~祝順利！ 2011-09-26 09:11:13
qiang7(金幣+1): 濃縮膠都濃縮了近1h了 還有沒有什么關(guān)鍵因素�。� 2011-05-18 11:11:22
adslye(金幣+1): 鼓勵交流~祝順利！ 2011-09-26 09:11:13
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會不會是分離膠中的聚丙酰胺沒有聚合，蛋白沒有孔徑進入分離膠，一般30分鐘左右分離膠都能聚合，TEMED的量不能太多，只是起加速聚合作用，多的話會使膠變硬，變脆，膠容易裂開，蛋白肯定就跑不進孔徑里了。覺得可能還是膠那里出了問題。 http://www.app17.com/dating/d805.html |
3樓2011-05-18 10:47:56
qiang7
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4樓2011-05-18 11:04:13
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