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蘿卜絲兒木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求助��！轉(zhuǎn)質(zhì)粒出現(xiàn)問(wèn)題了！
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從公司買來(lái)了一段基因（3.7kb），那段基因是連在公司提供的質(zhì)粒（2.7KB+3.7kb）上的，然后拿回來(lái)后就轉(zhuǎn)入E.coli，然后就是擴(kuò)增，提質(zhì)粒，酶切跑電泳，切膠回收（3.7kb），再把那個(gè)基因連到我們實(shí)驗(yàn)室自己構(gòu)建的載體（7.3kb）上，然后再做E.coli轉(zhuǎn)化，但是很妖的事情發(fā)生了��！涂版以后，挑取長(zhǎng)出來(lái)的單克隆，擴(kuò)增，提質(zhì)粒，酶切鑒定，得出的結(jié)果是3.7kb+2.7kb。。。做了好多好多遍都是這個(gè)結(jié)果，然后還用了菌落pcr鑒定那個(gè)質(zhì)粒上的基因，結(jié)果是正確的。。這到底是怎么回事��？ 求各位幫忙�。�！師兄一開(kāi)始認(rèn)為我實(shí)驗(yàn)技能不過(guò)關(guān)，然后自己上來(lái)做，也是這個(gè)情況，其他博后過(guò)來(lái)指導(dǎo)，結(jié)果也是這個(gè)，這到底是怎么回事啊？去磷酸化也做過(guò)了，但還是這個(gè)情況。。。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
蘿卜絲兒(金幣+2): 2011-06-05 15:11:25
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超螺旋的速度可不是按規(guī)矩來(lái)的 你的沒(méi)有切開(kāi)的部分質(zhì)粒是可以存在于你的大片段里的 你的對(duì)照做了嗎 有沒(méi)有直接把你回收的3.7kb片段做轉(zhuǎn)化？有沒(méi)有把你的3.7kb片段做一個(gè)自連，然后做轉(zhuǎn)化？如果這個(gè)沒(méi)做，說(shuō)明你的實(shí)驗(yàn)本身設(shè)計(jì)就不夠完善 從你的描述看，首要的懷疑點(diǎn)就是沒(méi)完全切開(kāi)，導(dǎo)致后續(xù)的失敗 其次，還有注意是不是你的菌在轉(zhuǎn)化似乎操作上污染，這樣問(wèn)題也需要做一個(gè)轉(zhuǎn)化水的對(duì)照 你的問(wèn)題是實(shí)驗(yàn)室做基因克隆常見(jiàn)的問(wèn)題，一點(diǎn)都不詭異，見(jiàn)多了就自然不怪了， 順便批評(píng)一下你的一句話，確切的說(shuō)是你的態(tài)度：" 操作方面絕對(duì)不存在問(wèn)題" 新手以后切忌說(shuō)這句話��！ 科研水深 |
8樓2011-05-30 11:59:22
gongeleven
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2樓2011-05-29 19:47:03
lw582482481
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3樓2011-05-29 20:54:38
蘿卜絲兒
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4樓2011-05-30 04:06:29
蘿卜絲兒
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5樓2011-05-30 05:10:23
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9樓2011-05-30 14:50:45
10樓2011-06-01 17:43:26
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