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PCR無任何條帶，完全是空白膠
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我最近做PCR時(shí)，模板是基因組，電泳圖除了Marker外，其他的一丁點(diǎn)條帶都沒有，完全是空白膠。我把所有體系全換新的，仍然沒有，現(xiàn)在懷疑是引物問題，想驗(yàn)證下引物。打算用高濃度的瓊脂膠（3%）來跑膠，能驗(yàn)證嗎？ [ Last edited by 武荷花S on 2011-5-29 at 22:25 ] |
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8樓2011-05-30 20:11:35
2樓2011-05-29 23:19:18
andy99990000
木蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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dhd997(金幣+5, EPI+1): 很好 2011-05-30 08:28:39
武荷花S(金幣+3): 2011-05-30 20:04:08
dhd997(金幣+5, EPI+1): 很好 2011-05-30 08:28:39
武荷花S(金幣+3): 2011-05-30 20:04:08
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樓主的圖里有陰性對照嗎？如果已包括的話，可以排除PCR體系污染的可能，那么很明顯你的PCR沒有正常工作，可能的原因很多，以個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，樓主可以嘗試以下幾個(gè)檢測方法： 1. 用實(shí)驗(yàn)室一定工作的引物擴(kuò)增你的DNA,這樣能夠看出除你的引物以外其他試劑是否工作正常。 2. 確定是引物的問題后還有2種可能： （1）你的PCR條件不適。按你的圖來看，完全沒工作，可以試試降低退火溫度，做touchdown，或者增加Mg離子濃度及循環(huán)次數(shù)等。 （2）如果以上全試過還是不工作，那么很大程度上就是你的引物設(shè)計(jì)或者合成的問題了。解決方法就是重新設(shè)計(jì)或者合成，呵呵，廢話了。 個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，希望有所幫助~~ |
3樓2011-05-30 00:23:51
eydalhm
新蟲 (初入文壇)
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4樓2011-05-30 01:42:39
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