 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3872 | 回復: 9 | |||
| 本帖產生 1 個 MolEPI ，點擊這里進行查看 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
向RTPCR高手求助，關于RTPCR的空白對照問題
|
|||
| 各位蟲友大家好，我最近初做RTPCR，想請教一下高手是不是用于RTPCR的每對引物使用前都得進行模板為水的空白對照實驗，以確定后期熔解曲線的峰是不是出現(xiàn)了特異性擴增，望高手解答，謝謝��！ |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有90人回復
-
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 請教RNA提取高手：反轉錄PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已經有18人回復
- 求高手指點：RT-PCR的引物設計
已經有18人回復
- 求助！關于RT-PCR的問題！
已經有20人回復
- 求助高手 有關RT-PCR
已經有5人回復
- 關于細菌RT-PCR的一些問題，希望同行探討一下
已經有4人回復
- ＲＴ－ＰＣＲ問題求助
已經有18人回復
- 【求助/交流】RT-PCR ，內參在哪個步驟添加以及marker何時使用及確定？謝謝
已經有14人回復
- 【求助/交流】RTPCR 內參
已經有4人回復
- 【求助/交流】RT-real time pcr問題
已經有6人回復
- 【求助/交流】qRT-PCR需要做不加RT的對照嗎？
已經有3人回復
- 【求助/交流】RT-PCR總是得不到目的條帶
已經有12人回復
- 【求助/交流】Real time RT-PCR 引物設計問題（高懸賞請高手幫忙）
已經有28人回復
3樓2011-06-18 17:04:58
beautybanana
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 22
- 應助: 23 (小學生)
- 貴賓: 0.02
- 金幣: 2973.8
- 散金: 5088
- 紅花: 26
- 帖子: 1694
- 在線: 485.8小時
- 蟲號: 1142157
- 注冊: 2010-11-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 納米生物學
2樓2011-06-17 18:21:21
西瓜
榮譽版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 應助: 94 (初中生)
- 貴賓: 3.157
- 金幣: 1849.6
- 散金: 11458
- 紅花: 116
- 沙發(fā): 21
- 帖子: 7553
- 在線: 1449.5小時
- 蟲號: 271749
- 注冊: 2006-08-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞衰老
- 管轄: 分子生物
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
yuyan225(金幣+7): 謝謝指教，收教了 2011-06-19 11:25:41
dhd997(金幣+5): good 2011-06-25 13:34:58
yuyan225(金幣+7): 謝謝指教，收教了 2011-06-19 11:25:41
dhd997(金幣+5): good 2011-06-25 13:34:58
|
看空白對照是一個辦法，不過就算加利模板，在融解曲線里也是可以看出引物二聚體的峰的。就算大小差不多，引物二聚體的結合強度肯定不及PCR產物，Tm值要低些，跟產物相比，出現(xiàn)峰的位置肯定在溫度更低的地方。而且一般峰也相對更低（熒光信號相對弱）。 如果有產物，那擴增曲線很早就會出現(xiàn)；如果是30個循環(huán)之后才出現(xiàn)擴增曲線，那可能就是引物二聚體了。 空白對照，應該每次PCR里面都加入，可以檢查是否有污染及引物二聚體的情況。 樓主在3樓里擔心的片段大小與引物二聚體差不多這種情況，應該很難出現(xiàn)吧。兩條引物加起來也就50bp不到，而熒光定量PCR的產物一般在150bp到300bp。所以，也可以在PCR之后跑個瓊脂糖凝膠電泳，一般能區(qū)分開PCR產物和引物二聚體。 |
4樓2011-06-18 22:13:58
5樓2011-06-19 11:27:39
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 297求調劑 +3 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 278求調劑 +5 | 煙火先于春 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 312求調劑 +5 | 陌宸希 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
[考研] 0703化學336分求調劑 +5 | zbzihdhd 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 26博士申請 +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 能源材料化學課題組招收碩士研究生8-10名 +3 | 脫穎而出 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 26考研求調劑 +6 | 丶宏Sir 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 梁成偉老師課題組歡迎你的加入 +8 | 一鴨鴨喲 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 283求調劑 +10 | 小樓。 2026-03-12 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 材料與化工 323 英一+數(shù)二+物化，一志愿：哈工大 本人本科雙一流 +4 | 自由的_飛翔 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +5 | 是Lupa啊 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 336求調劑 +6 | Iuruoh 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料工程調劑 +9 | 咪咪空空 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求材料調劑 +5 | 隔壁陳先生 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] （081700）化學工程與技術-298分求調劑 +12 | 11啦啦啦 2026-03-11 | 35/1750 |
|
|
|
[考研] 301求調劑 +6 | Liyouyumairs 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 274求調劑 +3 | S.H1 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328化工專碩求調劑 +4 | 。，。，。，。i 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化工學碩306求調劑 +9 | 42838695 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考博] 26讀博 +4 | Rui135246 2026-03-12 | 10/500 |
|