 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3864 | 回復(fù): 9 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||
yuyan225金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
向RTPCR高手求助，關(guān)于RTPCR的空白對照問題
|
||
| 各位蟲友大家好，我最近初做RTPCR，想請教一下高手是不是用于RTPCR的每對引物使用前都得進(jìn)行模板為水的空白對照實(shí)驗(yàn)，以確定后期熔解曲線的峰是不是出現(xiàn)了特異性擴(kuò)增，望高手解答，謝謝��！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有232人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 請教RNA提取高手：反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 求高手指點(diǎn)：RT-PCR的引物設(shè)計(jì)
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 求助！關(guān)于RT-PCR的問題！
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 求助高手 有關(guān)RT-PCR
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 關(guān)于細(xì)菌RT-PCR的一些問題，希望同行探討一下
已經(jīng)有4人回復(fù)
- ＲＴ－ＰＣＲ問題求助
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】RT-PCR ，內(nèi)參在哪個(gè)步驟添加以及marker何時(shí)使用及確定？謝謝
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】RTPCR 內(nèi)參
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】RT-real time pcr問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】qRT-PCR需要做不加RT的對照嗎？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】RT-PCR總是得不到目的條帶
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】Real time RT-PCR 引物設(shè)計(jì)問題（高懸賞請高手幫忙）
已經(jīng)有28人回復(fù)
beautybanana
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 22
- 應(yīng)助: 23 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.02
- 金幣: 2973.8
- 散金: 5088
- 紅花: 26
- 帖子: 1694
- 在線: 485.8小時(shí)
- 蟲號: 1142157
- 注冊: 2010-11-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 納米生物學(xué)
2樓2011-06-17 18:21:21
yuyan225
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1661.5
- 散金: 19
- 帖子: 109
- 在線: 156.1小時(shí)
- 蟲號: 536336
- 注冊: 2008-03-30
3樓2011-06-18 17:04:58
西瓜
榮譽(yù)版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 應(yīng)助: 94 (初中生)
- 貴賓: 3.157
- 金幣: 1849.6
- 散金: 11458
- 紅花: 116
- 沙發(fā): 21
- 帖子: 7553
- 在線: 1449.5小時(shí)
- 蟲號: 271749
- 注冊: 2006-08-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞衰老
- 管轄: 分子生物
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
yuyan225(金幣+7): 謝謝指教，收教了 2011-06-19 11:25:41
dhd997(金幣+5): good 2011-06-25 13:34:58
yuyan225(金幣+7): 謝謝指教，收教了 2011-06-19 11:25:41
dhd997(金幣+5): good 2011-06-25 13:34:58
|
看空白對照是一個(gè)辦法，不過就算加利模板，在融解曲線里也是可以看出引物二聚體的峰的。就算大小差不多，引物二聚體的結(jié)合強(qiáng)度肯定不及PCR產(chǎn)物，Tm值要低些，跟產(chǎn)物相比，出現(xiàn)峰的位置肯定在溫度更低的地方。而且一般峰也相對更低（熒光信號相對弱）。 如果有產(chǎn)物，那擴(kuò)增曲線很早就會出現(xiàn)；如果是30個(gè)循環(huán)之后才出現(xiàn)擴(kuò)增曲線，那可能就是引物二聚體了。 空白對照，應(yīng)該每次PCR里面都加入，可以檢查是否有污染及引物二聚體的情況。 樓主在3樓里擔(dān)心的片段大小與引物二聚體差不多這種情況，應(yīng)該很難出現(xiàn)吧。兩條引物加起來也就50bp不到，而熒光定量PCR的產(chǎn)物一般在150bp到300bp。所以，也可以在PCR之后跑個(gè)瓊脂糖凝膠電泳，一般能區(qū)分開PCR產(chǎn)物和引物二聚體。 |
4樓2011-06-18 22:13:58
yuyan225
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1661.5
- 散金: 19
- 帖子: 109
- 在線: 156.1小時(shí)
- 蟲號: 536336
- 注冊: 2008-03-30
5樓2011-06-19 11:27:39
西瓜
榮譽(yù)版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 應(yīng)助: 94 (初中生)
- 貴賓: 3.157
- 金幣: 1849.6
- 散金: 11458
- 紅花: 116
- 沙發(fā): 21
- 帖子: 7553
- 在線: 1449.5小時(shí)
- 蟲號: 271749
- 注冊: 2006-08-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞衰老
- 管轄: 分子生物
6樓2011-06-19 12:06:44
yuyan225
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1661.5
- 散金: 19
- 帖子: 109
- 在線: 156.1小時(shí)
- 蟲號: 536336
- 注冊: 2008-03-30
7樓2011-06-20 08:43:15
8樓2011-06-24 15:11:43
beautybanana
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 22
- 應(yīng)助: 23 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.02
- 金幣: 2973.8
- 散金: 5088
- 紅花: 26
- 帖子: 1694
- 在線: 485.8小時(shí)
- 蟲號: 1142157
- 注冊: 2010-11-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 納米生物學(xué)
9樓2011-06-24 17:57:58
beautybanana
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 22
- 應(yīng)助: 23 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.02
- 金幣: 2973.8
- 散金: 5088
- 紅花: 26
- 帖子: 1694
- 在線: 485.8小時(shí)
- 蟲號: 1142157
- 注冊: 2010-11-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 納米生物學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金幣+5, EPI+1): good 2011-06-25 13:35:22
dhd997(金幣+5, EPI+1): good 2011-06-25 13:35:22
|
染料法的RT-PCR，要把擴(kuò)增曲線和溶解曲線結(jié)合起來來檢驗(yàn)擴(kuò)增的結(jié)果，主要是檢查擴(kuò)增的特異性，如果出現(xiàn)由于錯(cuò)配而產(chǎn)生的非特異性產(chǎn)物，最好是另外做下電泳檢測更為保險(xiǎn)，實(shí)際上是一條擴(kuò)增曲線對應(yīng)一個(gè)PCR產(chǎn)物，而且應(yīng)該做幾個(gè)重復(fù)樣品，這時(shí)應(yīng)該多根據(jù)擴(kuò)增曲線去做判斷。沒有經(jīng)驗(yàn)的話就做個(gè)電泳。 |
10樓2011-06-25 00:48:08
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 yuyan225 的主題更新
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 281求調(diào)劑（0805） +3 | 煙汐憶海 2026-03-16 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +6 | 為學(xué)666 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩326求調(diào)劑 +6 | 墨煜姒莘 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +6 | 世界首富 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 26考研求調(diào)劑 +6 | 丶宏Sir 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工專碩調(diào)劑 +5 | heming3743 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 東南大學(xué)364求調(diào)劑 +5 | JasonYuiui 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3 | 藥學(xué)chy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600調(diào)劑 +5 | 漾漾123sun 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點(diǎn)0314 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 招收0805（材料）調(diào)劑 +3 | 18595523086 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 快樂的香蕉 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求材料調(diào)劑 +5 | 隔壁陳先生 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 7712b 2026-03-13 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 26調(diào)劑/材料科學(xué)與工程/總分295/求收留 +9 | 2026調(diào)劑俠 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 冬十三 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0817化學(xué)工程與技術(shù)考研312分調(diào)劑 +3 | T123 tt 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 26讀博 +4 | Rui135246 2026-03-12 | 10/500 |
|