 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3873 | 回復(fù): 9 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MolEPI ，點擊這里進行查看 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
向RTPCR高手求助，關(guān)于RTPCR的空白對照問題
|
|||
| 各位蟲友大家好，我最近初做RTPCR，想請教一下高手是不是用于RTPCR的每對引物使用前都得進行模板為水的空白對照實驗，以確定后期熔解曲線的峰是不是出現(xiàn)了特異性擴增，望高手解答，謝謝！！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有275人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 請教RNA提取高手：反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 求高手指點：RT-PCR的引物設(shè)計
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 求助！關(guān)于RT-PCR的問題！
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 求助高手 有關(guān)RT-PCR
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 關(guān)于細(xì)菌RT-PCR的一些問題，希望同行探討一下
已經(jīng)有4人回復(fù)
- ＲＴ－ＰＣＲ問題求助
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】RT-PCR ，內(nèi)參在哪個步驟添加以及marker何時使用及確定？謝謝
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】RTPCR 內(nèi)參
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】RT-real time pcr問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】qRT-PCR需要做不加RT的對照嗎？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】RT-PCR總是得不到目的條帶
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】Real time RT-PCR 引物設(shè)計問題（高懸賞請高手幫忙）
已經(jīng)有28人回復(fù)
beautybanana
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 22
- 應(yīng)助: 23 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.02
- 金幣: 2973.8
- 散金: 5088
- 紅花: 26
- 帖子: 1694
- 在線: 485.8小時
- 蟲號: 1142157
- 注冊: 2010-11-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 納米生物學(xué)
9樓2011-06-24 17:57:58
beautybanana
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 22
- 應(yīng)助: 23 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.02
- 金幣: 2973.8
- 散金: 5088
- 紅花: 26
- 帖子: 1694
- 在線: 485.8小時
- 蟲號: 1142157
- 注冊: 2010-11-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 納米生物學(xué)
2樓2011-06-17 18:21:21
3樓2011-06-18 17:04:58
西瓜
榮譽版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 應(yīng)助: 94 (初中生)
- 貴賓: 3.157
- 金幣: 1849.6
- 散金: 11458
- 紅花: 116
- 沙發(fā): 21
- 帖子: 7553
- 在線: 1449.5小時
- 蟲號: 271749
- 注冊: 2006-08-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞衰老
- 管轄: 分子生物
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
yuyan225(金幣+7): 謝謝指教，收教了 2011-06-19 11:25:41
dhd997(金幣+5): good 2011-06-25 13:34:58
yuyan225(金幣+7): 謝謝指教，收教了 2011-06-19 11:25:41
dhd997(金幣+5): good 2011-06-25 13:34:58
|
看空白對照是一個辦法，不過就算加利模板，在融解曲線里也是可以看出引物二聚體的峰的。就算大小差不多，引物二聚體的結(jié)合強度肯定不及PCR產(chǎn)物，Tm值要低些，跟產(chǎn)物相比，出現(xiàn)峰的位置肯定在溫度更低的地方。而且一般峰也相對更低（熒光信號相對弱）。 如果有產(chǎn)物，那擴增曲線很早就會出現(xiàn)；如果是30個循環(huán)之后才出現(xiàn)擴增曲線，那可能就是引物二聚體了。 空白對照，應(yīng)該每次PCR里面都加入，可以檢查是否有污染及引物二聚體的情況。 樓主在3樓里擔(dān)心的片段大小與引物二聚體差不多這種情況，應(yīng)該很難出現(xiàn)吧。兩條引物加起來也就50bp不到，而熒光定量PCR的產(chǎn)物一般在150bp到300bp。所以，也可以在PCR之后跑個瓊脂糖凝膠電泳，一般能區(qū)分開PCR產(chǎn)物和引物二聚體。 |
4樓2011-06-18 22:13:58
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +5 | 困于星晨 2026-03-17 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +6 | 簡單點0 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +9 | 負(fù)心者當(dāng)誅 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑0856材料化工 +13 | z2839474511 2026-03-11 | 14/700 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八旬速覽 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自動化所實習(xí) +6 | Losir 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 267一志愿南京工業(yè)大學(xué)0817化工求調(diào)劑 +6 | SUICHILD 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0854控制工程 359求調(diào)劑 可跨專業(yè) +3 | 626776879 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[基金申請]
今年的國基金是打分制嗎？
 50+3
|
zhanghaozhu 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 東華理工大學(xué)化材專業(yè)26屆碩士博士申請 +6 | zlingli 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +3 | ?醬給調(diào)劑跪了 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 工科，求調(diào)劑 +3 | 我887 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料工程調(diào)劑 +4 | 咪咪空空 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 314求調(diào)劑 +7 | 無懈可擊的巨人 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 程雨杭 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料301分求調(diào)劑 +5 | Liyouyumairs 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿山大07化學(xué) 332分 四六級已過 本科山東雙非 求調(diào)劑！ +3 | 不想理你 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +3 | d如愿上岸 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 福州大學(xué)楊黃浩課題組招收2026年專業(yè)學(xué)位博士研究生，2026.03.20截止 +3 | Xiangyu_ou 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑（食品/專碩） +3 | xc321 2026-03-12 | 6/300 |
|