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xuqingchun33銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
雙酶切體系是什么意思
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各位大俠，請問一下下面的這個(gè)雙酶切體系是什么意思？能否舉個(gè)例子，謝謝 Double Digestion with BamHI, NdeI We recommend: Buffer 2X Tango? 2-fold excess of BamHI 2-fold excess of NdeI Incubate at 37°C |
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shuifen1108
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3樓2011-07-02 15:38:19
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lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
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西瓜(金幣+5, EPI+1): Good!講得很清楚了！ 2011-07-02 16:48:36
xuqingchun33(金幣+1): 2011-07-03 12:49:56
西瓜(金幣+5, EPI+1): Good!講得很清楚了！ 2011-07-02 16:48:36
xuqingchun33(金幣+1): 2011-07-03 12:49:56
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一看就知道樓主用的是fermentas公司的限制性內(nèi)切酶。 Double Digestion with BamHI, NdeI就是選擇的酶是BamHI, NdeI。 We recommend: Buffer 2X Tango該公司推薦使用的酶切緩沖液是2X Tango，就是加酶切體系總體積的1/5的10X Tango。 2-fold excess of BamHI 2-fold excess of NdeI因?yàn)檫@兩個(gè)酶在2X Tango條件下活性都只有50-100%，不是100%，為了保證切割效率，所以加入的酶量是2倍。 Incubate at 37°C 這個(gè)就是酶切溫度了。 |
4樓2011-07-02 16:09:34
青菜小蟲
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【答案】應(yīng)助回帖
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西瓜(金幣+5): 鼓勵(lì)分享經(jīng)驗(yàn)。水浴這個(gè)缺點(diǎn)第一次聽說，學(xué)習(xí)了！ 2011-07-02 17:54:28
xuqingchun33(金幣+1): 2011-07-03 12:50:03
西瓜(金幣+5): 鼓勵(lì)分享經(jīng)驗(yàn)。水浴這個(gè)缺點(diǎn)第一次聽說，學(xué)習(xí)了！ 2011-07-02 17:54:28
xuqingchun33(金幣+1): 2011-07-03 12:50:03
| 我也用fermentas公司的限制性內(nèi)切酶。一般40ul 體系的話，10X Tango 8ul， BamHI, NdeI各0.8ul 。37°C放培養(yǎng)箱酶切過夜就可，或3-4小時(shí)，不建議水浴，因?yàn)殡x心管上下部溫度不一致，還造成揮發(fā)。 |
5樓2011-07-02 17:17:28
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