 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1746 | 回復(fù): 7 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
friya0910新蟲 (正式寫手)
|
[求助]
酶切的相關(guān)問(wèn)題
|
|||
| 本人做蛋白的體外表達(dá)，現(xiàn)在已把目的片段連接到T載體測(cè)序（測(cè)序中），上、下游引物分別含有NcoI和BamHI酶切位點(diǎn)，可是突然發(fā)現(xiàn)我的T載體在TA克隆位點(diǎn)附近（不超過(guò)10個(gè)堿基）也有BamHI酶切位點(diǎn)，那我后續(xù)要用這兩個(gè)酶雙酶切T載體獲得目的基因的話，載體上的BamHI酶切位點(diǎn)對(duì)我后續(xù)實(shí)驗(yàn)的影響大不大啊？懇請(qǐng)高人指點(diǎn)一下！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有208人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- PCR產(chǎn)物凝膠回收、酶切等問(wèn)題請(qǐng)教
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求助 雙酶切驗(yàn)證陽(yáng)性克隆的問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 表達(dá)載體構(gòu)建的相關(guān)問(wèn)題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 單酶切，酶連之后驗(yàn)證問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求，原核表達(dá)相關(guān)問(wèn)題？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】單酶切酶和DNA的比例，體系大小的問(wèn)題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】酶切連接后的分子大小問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于酶切產(chǎn)物連接的一點(diǎn)問(wèn)題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒pPICZA酶切問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】酶切滅活問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
ljpsinsun
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 359
- 帖子: 79
- 在線: 95.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1325924
- 注冊(cè): 2011-06-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 作物分子育種
7樓2011-08-26 12:48:33
冼亮淀粉酶
專家顧問(wèn) (知名作家)
生物大分子降解酶
-
專家經(jīng)驗(yàn): +248 - MolEPI: 46
- 應(yīng)助: 257 (大學(xué)生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19474.4
- 散金: 1704
- 紅花: 121
- 帖子: 6590
- 在線: 2778小時(shí)
- 蟲號(hào): 856414
- 注冊(cè): 2009-09-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
- 管轄: 微生物
★ ★ ★
dhd997(金幣+3): good 2011-07-05 19:16:53
amisking: 2011-07-05 20:04:13
dhd997(金幣+3): good 2011-07-05 19:16:53
amisking: 2011-07-05 20:04:13
|
BamHI雖然說(shuō)活力比較高，但是也不排除可能有失效或者操作不當(dāng)造成酶切不完全，只能切去其中一個(gè)位點(diǎn)的情況，因?yàn)檫@兩個(gè)位點(diǎn)相隔很近，跑膠的時(shí)候是看不出10個(gè)堿基的差別的，這樣就可能造成回收的外源片段中有一部分還帶有幾個(gè)載體上的堿基。 我建議你設(shè)計(jì)引物的時(shí)候不要選用載體上存在的酶切位點(diǎn)，消除這個(gè)隱患。 |
2樓2011-07-05 18:57:15
friya0910
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 19.4
- 散金: 360
- 帖子: 401
- 在線: 77.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1073675
- 注冊(cè): 2010-08-12
- 專業(yè): 作物分子育種
3樓2011-07-05 19:18:46
冼亮淀粉酶
專家顧問(wèn) (知名作家)
生物大分子降解酶
-
專家經(jīng)驗(yàn): +248 - MolEPI: 46
- 應(yīng)助: 257 (大學(xué)生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19474.4
- 散金: 1704
- 紅花: 121
- 帖子: 6590
- 在線: 2778小時(shí)
- 蟲號(hào): 856414
- 注冊(cè): 2009-09-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
- 管轄: 微生物
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
西瓜(金幣+3): 學(xué)習(xí)了！ 2011-07-05 19:59:52
amisking(EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-05 20:04:19
西瓜(金幣+3): 學(xué)習(xí)了！ 2011-07-05 19:59:52
amisking(EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-05 20:04:19
|
不過(guò)話說(shuō)回來(lái)，你為什么要先TA克隆呢？如果PCR出來(lái)之后直接將表達(dá)載體和外源片段雙酶切，然后連接，再轉(zhuǎn)化大腸桿菌，挑取陽(yáng)性單克隆培養(yǎng)提質(zhì)粒，這時(shí)候再測(cè)序就省事了，也不用擔(dān)心你載體上的BamHI酶切位點(diǎn)的干擾了，這樣一來(lái)整個(gè)含有你的片段的質(zhì)粒上就只有一個(gè)BamHI位點(diǎn)了，完全沒(méi)有隱患。 測(cè)序費(fèi)錢也不多，一個(gè)反應(yīng)就30塊錢而已，但可以測(cè)定超過(guò)600bp。 而且要雙向測(cè)通，因?yàn)闇y(cè)序是兩端不準(zhǔn)的，從單鏈得到的結(jié)果可能含有不準(zhǔn)的區(qū)間，需要從另一條單鏈測(cè)得的結(jié)果來(lái)拼接。 |
4樓2011-07-05 19:45:03
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工272求調(diào)劑 +4 | 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 320分，材料與化工專業(yè)，求調(diào)劑 +7 | 一定上岸aaa 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 315分求調(diào)劑 +7 | 26考研上岸版26 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +11 | 陽(yáng)陽(yáng)哇塞 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +7 | 邱gl 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿華東理工大學(xué)081700，初試分?jǐn)?shù)271 +6 | kotoko_ik 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +7 | 安憶靈 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +10 | 呼呼？~+123456 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +4 | lim0922 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿陜師大生物學(xué)071000，298分，求調(diào)劑 +5 | SYA！ 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 蘆lty 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +8 | Auroracx 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境專碩324分求調(diào)劑推薦 +5 | 軒小寧—— 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械學(xué)碩總分317求調(diào)劑�。。�！ +4 | Acaciad 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 13853210211 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 研研，接電話 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿山東大學(xué)藥學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 開(kāi)開(kāi)心心沒(méi)煩惱 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 070300，一志愿北航320求調(diào)劑 +3 | Jerry0216 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 一志愿070300浙大化學(xué)358分，求調(diào)劑！
+4
|
酥酥魚.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 石河子大學(xué)（211、雙一流）碩博研究生長(zhǎng)期招生公告 +3 | 李子目 2026-03-22 | 3/150 |
|