 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1912 | 回復(fù): 8 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
9k表達(dá)質(zhì)粒 電轉(zhuǎn)化km71
|
|||
|
大家好，我用的是pPIC9k表達(dá)質(zhì)粒 電轉(zhuǎn)化km71之后是涂什么平板篩選重組子呢，謝謝了, 我之前涂的是YPD+G418 ,看文獻(xiàn)怎么是MM之類 ，不知做何選擇 [ Last edited by qwky2010 on 2011-7-24 at 10:18 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有94人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- “偷”taq酶質(zhì)粒記
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 原核表達(dá)問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 酶切質(zhì)粒DNA選什么材料比較好？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 請(qǐng)問大家分析抗性基因（或差異表達(dá)基因等相關(guān)的）的方法有哪些？比如DNA微陣列。。。
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 請(qǐng)教各位高人，基因克隆表達(dá)的流程是什么？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 有木有大腸桿菌單拷貝的表達(dá)質(zhì)粒？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 做酶切連接后轉(zhuǎn)化再提質(zhì)粒，質(zhì)粒明顯變小，Why???
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 如何讓質(zhì)粒表達(dá)--啟動(dòng)子？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】表達(dá)載體轉(zhuǎn)化后,提取的質(zhì)粒和原來不一樣了啊
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌轉(zhuǎn)化質(zhì)粒，出來的不是我要的了，怎么回事？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】求助：Western檢測(cè)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】誘導(dǎo)pkd46質(zhì)粒表達(dá)不出目的蛋白
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于質(zhì)粒構(gòu)建與表達(dá)的問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 電轉(zhuǎn)化注意事項(xiàng)
已經(jīng)有14人回復(fù)
cdl007
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 41
- 應(yīng)助: 46 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.025
- 金幣: 2570.6
- 紅花: 11
- 帖子: 545
- 在線: 123.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 275133
- 注冊(cè): 2006-08-27
- 專業(yè): 腫瘤病因
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金幣+6, EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-24 19:27:59
amisking(金幣+6, EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-24 19:27:59
|
樓主沒說用于真核或原核，。。 仔細(xì)查了一下 卡那能結(jié)合細(xì)菌核糖體的30S亞基上的16S rRNA，干擾formyl-methionyl-tRNA 與30SrRNA的連接，阻斷細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，對(duì)真核作用不大，真不到篩選的作用。 看宿主了，宿主是原核的用kana，是真核的話用G418 dxy上查了查，下面這個(gè)比較專業(yè)，一起學(xué)習(xí)之 一般卡那霉素抗性基因編碼的是新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶II，基因記做neo，能通過降解G418、新霉素和卡那霉素來實(shí)現(xiàn)真核和原核細(xì)胞的相應(yīng)抗性，這個(gè)酶在基因工程中是比較特殊的，既可以再原核生物中表達(dá)使大腸桿菌等表現(xiàn)出卡那霉素抗性，也可以再真核生物中表達(dá)使動(dòng)植物細(xì)胞表現(xiàn)出G418抗性。因?yàn)榭敲顾貙?duì)真核生物沒什么作用，所以一般應(yīng)用于原核生物就是卡那霉素抗性基因，應(yīng)用于真核生物就是G418抗性。如果需要在原核生物中應(yīng)用，必須要加上原核生物對(duì)應(yīng)宿主的啟動(dòng)子，為大腸桿菌設(shè)計(jì)的卡那抗性基因一般因啟動(dòng)子不通用，難以在革蘭氏陽(yáng)性菌和其他親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的宿主中表現(xiàn)出卡那霉素抗性。而如果需要在真核生物中使用，則必須加上相應(yīng)受體中能發(fā)揮作用的啟動(dòng)子，如需要在酵母中用G418篩選則需要加上酵母的啟動(dòng)子，如果需要在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中使用G418篩選則需要加上哺乳動(dòng)物細(xì)胞啟動(dòng)子等等。所以載體直接決定在目的細(xì)胞中是否能表達(dá)該基因，是否能表現(xiàn)相應(yīng)的抗性。當(dāng)然，真核生物中選擇G418，原核生物中選擇卡那霉素。 為原核生物表達(dá)所設(shè)計(jì)的表達(dá)載體如pET28a，其neo基因啟動(dòng)子只能在大腸桿菌等革蘭氏陰性菌中啟動(dòng)抗性基因的表達(dá)，是不能在真核生物中用于G418抗性篩選的。同樣，比如用于酵母表達(dá)的載體pPIC9K，攜帶一個(gè)氨芐抗性基因，同時(shí)攜帶的neo基因能在酵母中啟動(dòng)也能在大腸桿菌中啟動(dòng)，故可用于重組酵母G418篩選和大腸桿菌卡那霉素篩選，但同樣也不能用于在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的G418篩選。而pIRES2中只有一個(gè)neo抗性基因，但是既能在大腸桿菌中啟動(dòng)也能在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中啟動(dòng)，故而可用于大腸桿菌卡那霉素抗性篩選和哺乳動(dòng)物細(xì)胞G418篩選，但是不能用于酵母等其他真核生物的G418抗性篩選。 |
qwky20107樓2011-07-24 12:03:33
cdl007
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 41
- 應(yīng)助: 46 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.025
- 金幣: 2570.6
- 紅花: 11
- 帖子: 545
- 在線: 123.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 275133
- 注冊(cè): 2006-08-27
- 專業(yè): 腫瘤病因
【答案】應(yīng)助回帖
qwky2010(金幣+10): 謝謝你，不過這個(gè)載體的說明書上提供的是g418篩選的呀，我就不懂了，請(qǐng)指點(diǎn)，謝謝 2011-07-24 10:47:31
amisking: 2011-07-24 19:27:42
amisking: 2011-07-24 19:27:42
|
http://blog.sina.com.cn/s/blog_6007f6d00100i0el.html 質(zhì)粒圖譜中并無neo抗性位點(diǎn)，用g418篩選沒用 可以用amp 藍(lán)白斑法篩選 或者用卡那霉素篩選 |
2樓2011-07-24 10:43:10
3樓2011-07-24 10:51:00
lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 58
- 應(yīng)助: 388 (碩士)
- 貴賓: 0.238
- 金幣: 17138.7
- 紅花: 43
- 帖子: 2251
- 在線: 712.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 111074
- 注冊(cè): 2005-11-20
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
qwky2010(金幣+10): 謝謝啦 我見文獻(xiàn)有用MM平板篩選的，到底哪個(gè)好些呢 2011-07-24 10:59:32
amisking: 2011-07-24 19:27:48
amisking: 2011-07-24 19:27:48
|
樓上說的不完全正確！ pPIC9k轉(zhuǎn)大腸桿菌是用卡那霉素篩選，轉(zhuǎn)酵母就不能用卡那霉素篩選，只能用G418抗性篩選（原因是一個(gè)是原核生物一個(gè)是真核生物，有效的抗生素不一樣），，而且還可以用不同濃度G418篩選多拷貝轉(zhuǎn)化子。 電轉(zhuǎn)化之后篩選重組子用YPD+G418事可以的。 |
4樓2011-07-24 10:54:58
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600 材料與化工 329分求調(diào)劑 +13 | Mr. Z 2026-03-25 | 13/650 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +13 | zhn03 2026-03-25 | 14/700 |
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | wei-5 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)105500求調(diào)劑 +3 | Ssun。。 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 081200-314 +3 | LILIQQ 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +8 | 小木蟲085600 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑 +5 | 求求讓我有書讀?/a> 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 279 分 求調(diào)劑 +4 | 睡個(gè)好覺_16 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑，一志愿南農(nóng)083200食品科學(xué)與工程 +5 | XQTJZ 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分，求調(diào)劑 +9 | 大饞小子 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | question挽風(fēng) 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +9 | 上岸吧ZJY 2026-03-22 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | .m.. 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑323材料與化工 +7 | 1124361 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿陜師大生物學(xué)071000，298分，求調(diào)劑 +5 | SYA！ 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +3 | 丹青奶蓋 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +6 | 生如夏花… 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | 032500 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 網(wǎng)絡(luò)空間安全0839招調(diào)劑 +4 | w320357296 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[論文投稿] 急發(fā)核心期刊論文 +3 | 賢達(dá)問津 2026-03-23 | 5/250 |
|