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目的蛋白加myc或his標(biāo)簽？
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最近在研究一個(gè)蛋白的表達(dá)量，但是來(lái)不及做抗體了，想直接在目的蛋白的后面l連個(gè)myc或his標(biāo)簽，可以直接用標(biāo)簽的抗體來(lái)檢測(cè)目的蛋白的變化。 但是我的目的基因（藍(lán)藻、原核生物）與它前后的基因均存在重疊的部分，如果加標(biāo)簽會(huì)不會(huì)影響它前后基因的功能？這種情況還能加標(biāo)簽嗎？怎么加？ 請(qǐng)高手指點(diǎn)！我是個(gè)新蟲(chóng)，金幣較少，請(qǐng)見(jiàn)諒！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-25 20:42:46
shuihaizi(金幣+2): 2011-07-25 21:58:36
amisking(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-25 20:42:46
shuihaizi(金幣+2): 2011-07-25 21:58:36
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樓主說(shuō)的目的基因與它前后的基因均存在重疊是什么意思？不太明白。 以我個(gè)人的經(jīng)驗(yàn)，可以在你目的蛋白加上標(biāo)簽，在標(biāo)簽和目的蛋白之間引入一個(gè)蛋白酶，這樣你可以通過(guò)標(biāo)簽抗體來(lái)定表達(dá)量，然后用蛋白酶切割來(lái)研究目的蛋白。這樣不僅可以定量，也可以研究蛋白性質(zhì)。 具體可以再N端加上His標(biāo)簽，His標(biāo)簽與目的蛋白之前引入腸激酶。PS：比較推薦使用腸激酶的原因是腸激酶識(shí)別序列是DDDDK而發(fā)生切割是在K的后面，也就是說(shuō)可以讓你的目的蛋白有完整的N端，但是如果你目的蛋白序列里存在DDDDK或者DDDK或者DDK甚至DK都會(huì)發(fā)生非特異切割。如果這種情況就不建議您使用了。 貌似跑題了。。。。總之，有問(wèn)題再交流 = =！ |
2樓2011-07-25 20:27:38
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我的目的基因是原核生物，目前試驗(yàn)不需要切掉標(biāo)簽(原核生物能表達(dá)腸激酶嗎？)，我只想在目的基因上連個(gè)Myc，從而用Myc的抗體進(jìn)行檢測(cè).關(guān)鍵問(wèn)題是：在基因組中，目的基因的前后基因的編碼區(qū)有重疊，比如說(shuō)ABC三個(gè)基因，其中A的末尾是B的開(kāi)始，而B(niǎo)的末尾又是C的開(kāi)始，不知道這樣你明白嗎？我擔(dān)心在目的基因B末尾(即TAA之前）連上標(biāo)簽，會(huì)影響C的不知道結(jié)構(gòu)和功能。不知道你是否有遇到過(guò)相關(guān)的問(wèn)題？ 謝謝你的回答，很受益。  |
3樓2011-07-25 22:05:35
4樓2011-07-25 22:44:53
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
西瓜(金幣+3): Good! 2011-07-25 23:47:59
shuihaizi(金幣+5): 2011-07-26 08:34:25
西瓜(金幣+3): Good! 2011-07-25 23:47:59
shuihaizi(金幣+5): 2011-07-26 08:34:25
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這個(gè)問(wèn)題確實(shí)挺麻煩，不知道你所說(shuō)的A和C基因承擔(dān)的是調(diào)控作用呢 還是跟B一樣表達(dá)出蛋白。如果是前者，引入標(biāo)簽多半會(huì)影響功能，我有一個(gè)想法，比如把tag加到AB之間，在tag的前端重構(gòu)A和B的重疊區(qū)，在tag后也重建這個(gè)重疊區(qū)，相當(dāng)于把這兩個(gè)基因分開(kāi)，這樣不知道是否可行。如果是后者你是不是可以像樓上說(shuō)的那樣避開(kāi)重疊區(qū)域加到整個(gè)蛋白的前端或者末端呢。 |
5樓2011-07-25 23:42:28
6樓2011-07-26 08:39:56
dasheng1980
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7樓2011-12-11 10:59:35
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8樓2011-12-11 13:58:47
lyl19860712
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9樓2012-06-20 10:14:46
lyl19860712
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10樓2012-06-20 10:25:37
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