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暗夜懶貓銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
載體構(gòu)建成功下一步遇難
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| 好不容易構(gòu)建成功了一個載體，在把提取的質(zhì)粒導入表達受體細胞，涂卡那抗性的板長出菌落，但挑取菌落用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，做菌液PCR檢測目的基因條帶時，卻沒有條帶出現(xiàn)。請問各位高手這是怎么回事？是質(zhì)粒沒導進去？還是質(zhì)粒丟失了呢？ |
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暗夜懶貓
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6樓2011-10-05 10:40:18
2樓2011-10-04 19:32:42
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【答案】應助回帖
★ ★ ★
wanhscn(金幣+3): 鼓勵應助！ 2011-10-05 17:36:12
wanhscn(金幣+3): 鼓勵應助！ 2011-10-05 17:36:12
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呵呵，你是不是用的PET載體啊 1.看清楚你用的感受態(tài)細胞能不能接受這類的的載體哦，Origami™ B系列的菌對kan是不敏感的，如果你實在需要保證蛋白二硫鍵的形成，可以考慮換成Origami™ 2系列的感受態(tài)。 2.如果你確定了不是宿主菌和載體匹配性問題，那么很可能是載體丟失了，你搖菌的時候加入了kan沒，如果沒加，問題大概就出這里了。 3.你挑取的菌落應該做一個菌落PCR，確保不做無用功，因為單靠抗生素篩選，貌似假陽性很高的耶。 我最近也在做表達，多多交流 嘿嘿 |
3樓2011-10-04 22:42:03
暗夜懶貓
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4樓2011-10-05 08:26:39
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