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兩種引物的PCR電泳圖，做了多次還是不解
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下面我的PCR電泳圖，彩色圖第一個是Marker，誠然Marker跑得不好，買來直接用，可是每次都跑不開。 因為我做的是T-RFLP即末端限制性酶切技術，所以用的是帶熒光的引物，選擇時我參考的文獻人家也選擇的這樣的，P出的片段大約是1.5KB，左起第2,3個是DNA的PCR，4,5是空白，可是為什么有條帶，做了很多次都這樣。后面四個是用另一種引物做的，不帶熒光，P出的片段是100多bp，靠右邊兩個是空白。 不知道有沒有人也是做T-RFLP的，能否傳授些寶貴經驗，后面就是要切割膠片進行純化，然后對PCR產物進行酶切，可是PCR這是做不好，下面一直無法進行下去。 附上之前做過的黑白圖，用的是帶熒光的引物做的，每次都呈現這樣的圖，之前我也沒觀察顏色的不同，一直解不開謎團。這樣分析的話是不是跑得比較慢的是我需要的片段呢，如何去除不需要的熒光片段呢？ [ Last edited by 樹寶寶zyx on 2011-10-16 at 12:30 ] |
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8樓2011-10-17 09:34:35
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電泳液是配的50倍的保存在4°C冰箱，需要的時候稀釋了再用的。不過那個配了倒是有2個多月了，是不是有關系呢。制膠和電泳液下次我盡量用統(tǒng)一配的，有時候不是同一次配的可能濃度稍有不同。下面是我新做的PCR，用的都是一樣的引物。自左起前兩個是空白，接下來四個是用降落式的溫度。第7,8是兩個空白，最后四個是恒溫循環(huán)。94°C，3min；94°C 45s，54°C 30S，72°C 1min；72°C 10min�？粗鴳撌呛銣貤l件效果好，不知道這個拖尾問題如何解決。而且空白總是有條帶。。。東西我都是新近買的，自從買來以后開始做就從來都是有條帶，都不知道為什么。。 |
9樓2011-10-17 12:49:46
10樓2011-10-17 13:02:11
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