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baby0032新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于GC含量高的模板
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各位大俠，請(qǐng)求幫助~~ 1.我的基因組是鏈霉菌，GC含量很高，有沒有哪家測(cè)這方面比較靠譜的測(cè)序公司推薦一個(gè)呀？ 2.之前測(cè)序了幾個(gè)基因，但是都發(fā)現(xiàn)了同一個(gè)問題，比如送了一個(gè)基因的兩個(gè)克隆子（菌液，即平行樣）但是這兩個(gè)的測(cè)序結(jié)果堿基竟然有7~8個(gè)不一樣，是用EX TAQ做的，而且片段才將近1K，之前做克隆時(shí)都沒發(fā)現(xiàn)這樣的情況。請(qǐng)問這是什么問題呢？ 小妹囊中羞澀，懸賞較少，還望各位大俠幫幫可憐的路人吧~~  |
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yabxxh
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
mengfei8336(MolEPI+1): 謝謝參與。 2011-12-15 09:26:03
baby0032(金幣+1): 2011-12-16 11:13:54
mengfei8336(MolEPI+1): 謝謝參與。 2011-12-15 09:26:03
baby0032(金幣+1): 2011-12-16 11:13:54
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呵呵，我剛做完了一個(gè)基因，GC含量片段前端局部高達(dá)87%，片段長(zhǎng)3kb。Taq酶我也是一路涌過來的。不要用EXTAQ，也不要用LA TAQ，Prime Star with GC Buffer才是王道。ExTaq我沒用過，因?yàn)樗静蝗胛业姆ㄑ郏琇ataq With GC buffer我前期一直用，效果不咋地，根本得不到片段，現(xiàn)在還有幾管新的躺在我的冰箱。當(dāng)然了，我的片段比較長(zhǎng)，可能你的1KB能搞定也說不定。不過帶gc buffer 的lataq和primestar價(jià)格方面來說，prime star才貴了50，我們?yōu)槭裁床灰徊降轿恢苯佑胮rimestar呢。 希望對(duì)你有點(diǎn)幫助，好運(yùn) |
8樓2011-12-15 09:13:55
blackrose8089
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7樓2011-12-15 08:20:54
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程序稍有變化，樓主可以試一下，曾經(jīng)用這個(gè)擴(kuò)出過7.3k的片段，無堿基錯(cuò)誤. 9樓2011-12-15 09:54:56
baby0032
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10樓2011-12-15 10:36:10
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