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cjzyfx木蟲 (正式寫手)
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[求助]
RNA 提取的一些問(wèn)題，請(qǐng)大家?guī)兔卮?
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1 RNA提取的時(shí)候怎么樣有效的避免DNA的污染？ 2 RNA提取后在-20放置，可保存多久？ 3 大家用的trizol是自己配的還是買的？ 謝謝啊 |
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amisking(金幣+3, MolEPI+1): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流！ 2012-02-14 19:55:16
cjzyfx(金幣+1): ★★★★★最佳答案 謝謝，很詳細(xì) 2012-02-15 18:03:48
amisking(金幣+3, MolEPI+1): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流！ 2012-02-14 19:55:16
cjzyfx(金幣+1): ★★★★★最佳答案 謝謝，很詳細(xì) 2012-02-15 18:03:48
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1、在提取過(guò)程增加DNase消化步驟。除使用酶消化外的方法去DNA都不是很徹底。視后續(xù)實(shí)驗(yàn)而定。 2、如有條件最好放-80保存。主要擔(dān)心是如果提得不純（有雜質(zhì)或未完全滅活的RNase）在-20度保存過(guò)程中降解。且這個(gè)保存時(shí)間跟物種、提取方法等有關(guān)。嘗試過(guò)有些物種的RNA放-20度保存一個(gè)月后出現(xiàn)降解的情況（未知是提得不純或物種原因） 3、實(shí)驗(yàn)要求不高可以自己配點(diǎn)Trizol來(lái)提，如果重要的實(shí)驗(yàn)建議還是購(gòu)買invitrogen的。 |
2樓2012-02-14 17:49:20
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5樓2012-02-15 01:51:57
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8樓2012-02-15 11:40:30
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【答案】應(yīng)助回帖
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西瓜(金幣+3): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-02-15 22:25:18
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1.RNA提取注意事項(xiàng)很多，但都是一個(gè)目的：放置降解和雜質(zhì)干擾，特別是降解。相關(guān)儀器的DEPC處理自不必說(shuō)，還有操作臺(tái)面以及移液器的75%乙醇擦拭、研缽的180度處理，再就是操作者的口罩手套防護(hù)，操作過(guò)程的低溫保持等等。 2. 提取的RNA我從來(lái)不放到-20度，除非幾分鐘之后馬上進(jìn)行下面的操作，避免反復(fù)凍融。倒是有一次一個(gè)同學(xué)勿放到-20度約一個(gè)月，基本不能用了。 3. Trizol都是買的，一直用的寶生物，好像很可以。 |
9樓2012-02-15 11:52:15
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10樓2012-02-15 15:20:29
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