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T7載體的IPTG誘導(dǎo)
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大家好! 我在做基因克隆,載體用的是T7載體,由于克隆的基因較多,所以蛋白誘導(dǎo)方面比較麻煩?赡苊總(gè)基因所表達(dá)蛋白的條件都不一樣,我現(xiàn)在想粗略的看一下誘導(dǎo)時(shí)間和溫度以及誘導(dǎo)劑添加量對(duì)誘導(dǎo)的影響,我用的誘導(dǎo)劑是IPTG。我想請(qǐng)教一下一般IPTG在溫度,時(shí)間,用量上有沒有通用的范圍或規(guī)則?我有看過文獻(xiàn)報(bào)道,說T7載體用IPTG誘導(dǎo)會(huì)容易形成包涵體。 而且我現(xiàn)在是粗略的誘導(dǎo)檢測(cè)有無蛋白表達(dá),所以并沒有在OD=0.6-0.8時(shí)誘導(dǎo),而且誘導(dǎo)一般是過夜誘的,誘導(dǎo)溫度20℃,不知會(huì)否對(duì)這種載體的誘導(dǎo)有影響? 我的宿主細(xì)胞是BL21. 請(qǐng)同行高手給與指教! |
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