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T7載體的IPTG誘導(dǎo)
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大家好！ 我在做基因克隆，載體用的是T7載體，由于克隆的基因較多，所以蛋白誘導(dǎo)方面比較麻煩�？赡苊總�(gè)基因所表達(dá)蛋白的條件都不一樣，我現(xiàn)在想粗略的看一下誘導(dǎo)時(shí)間和溫度以及誘導(dǎo)劑添加量對(duì)誘導(dǎo)的影響，我用的誘導(dǎo)劑是IPTG。我想請(qǐng)教一下一般IPTG在溫度，時(shí)間，用量上有沒(méi)有通用的范圍或規(guī)則？我有看過(guò)文獻(xiàn)報(bào)道，說(shuō)T7載體用IPTG誘導(dǎo)會(huì)容易形成包涵體。 而且我現(xiàn)在是粗略的誘導(dǎo)檢測(cè)有無(wú)蛋白表達(dá)，所以并沒(méi)有在OD=0.6-0.8時(shí)誘導(dǎo)，而且誘導(dǎo)一般是過(guò)夜誘的，誘導(dǎo)溫度20℃，不知會(huì)否對(duì)這種載體的誘導(dǎo)有影響？ 我的宿主細(xì)胞是BL21. 請(qǐng)同行高手給與指教！ |
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4樓2012-02-23 21:30:27
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