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uuu555000捐助貴賓 (正式寫手)
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[求助]
關于菌液PCR的DNA模板制備，
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| 最近看了關于菌液pcr的DNA模板的制備，這種方法很簡便，我們實驗室條件有限，無液氮，目前考慮這種方法，實驗室目前研究尖孢鐮刀菌，看文獻看過關于酵母菌的菌液pcr，愣是沒找到關于尖孢鐮刀菌的菌液PCR的DNA模板制備的方法，求關于尖孢鐮刀菌的菌液PCR的DNA模板制備的方法， |
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uuu555000
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2樓2012-03-10 06:12:46
xstarsky
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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①25mg菌絲干粉于1.5mL離心管； ②加入500uL提取緩沖液（5mM/L Tris-HCl，pH8.0; 150mM/L NaCl，100mM/L EDTA）懸浮干粉，在渦流振蕩器上混勻； ③加入50uL 10% SDS和2uL 20mg/mL的蛋白酶K，37℃溫浴1h； ④加入75uL 5M/L NaCl和65uL CTAB/NaCl溶液，65℃溫育20min； ⑤用等體積的苯酚：氯仿：異戊醇（25：24：1）抽提1次，10，000g離心10min，取上清液移至干凈管中； ⑥將上清液，再加入等體積的氯仿：異戊醇（24：1）抽提1次； ⑦如水相與有機相之間仍有雜質，再重復抽提過程； ⑧上清液中加入0.6倍體積的異丙醇沉淀DNA（-20℃放置1-2h），10,000g離心10min； ⑨取沉淀，加70%乙醇洗1遍； ⑩真空干燥后將DNA溶解在TE緩沖液（10mM Tris-HCl,pH7.5; 0.1mMEDTA中，-70℃保存）。 |
3樓2012-03-10 07:43:41
bigboy123
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4樓2012-03-10 07:52:02
lw19850128
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5樓2012-10-09 09:30:56
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