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uuu555000捐助貴賓 (正式寫(xiě)手)
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關(guān)于菌液PCR的DNA模板制備,
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| 最近看了關(guān)于菌液pcr的DNA模板的制備,這種方法很簡(jiǎn)便,我們實(shí)驗(yàn)室條件有限,無(wú)液氮,目前考慮這種方法,實(shí)驗(yàn)室目前研究尖孢鐮刀菌,看文獻(xiàn)看過(guò)關(guān)于酵母菌的菌液pcr,愣是沒(méi)找到關(guān)于尖孢鐮刀菌的菌液PCR的DNA模板制備的方法,求關(guān)于尖孢鐮刀菌的菌液PCR的DNA模板制備的方法, |

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鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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①25mg菌絲干粉于1.5mL離心管; ②加入500uL提取緩沖液(5mM/L Tris-HCl,pH8.0; 150mM/L NaCl,100mM/L EDTA)懸浮干粉,在渦流振蕩器上混勻; ③加入50uL 10% SDS和2uL 20mg/mL的蛋白酶K,37℃溫浴1h; ④加入75uL 5M/L NaCl和65uL CTAB/NaCl溶液,65℃溫育20min; ⑤用等體積的苯酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)抽提1次,10,000g離心10min,取上清液移至干凈管中; ⑥將上清液,再加入等體積的氯仿:異戊醇(24:1)抽提1次; ⑦如水相與有機(jī)相之間仍有雜質(zhì),再重復(fù)抽提過(guò)程; ⑧上清液中加入0.6倍體積的異丙醇沉淀DNA(-20℃放置1-2h),10,000g離心10min; ⑨取沉淀,加70%乙醇洗1遍; ⑩真空干燥后將DNA溶解在TE緩沖液(10mM Tris-HCl,pH7.5; 0.1mMEDTA中,-70℃保存)。 |
銅蟲(chóng) (小有名氣)

銀蟲(chóng) (小有名氣)
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