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[求助]
關(guān)于菌液PCR的DNA模板制備，
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| 最近看了關(guān)于菌液pcr的DNA模板的制備，這種方法很簡(jiǎn)便，我們實(shí)驗(yàn)室條件有限，無液氮，目前考慮這種方法，實(shí)驗(yàn)室目前研究尖孢鐮刀菌，看文獻(xiàn)看過關(guān)于酵母菌的菌液pcr，愣是沒找到關(guān)于尖孢鐮刀菌的菌液PCR的DNA模板制備的方法，求關(guān)于尖孢鐮刀菌的菌液PCR的DNA模板制備的方法， |
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①25mg菌絲干粉于1.5mL離心管； ②加入500uL提取緩沖液（5mM/L Tris-HCl，pH8.0; 150mM/L NaCl，100mM/L EDTA）懸浮干粉，在渦流振蕩器上混勻； ③加入50uL 10% SDS和2uL 20mg/mL的蛋白酶K，37℃溫浴1h； ④加入75uL 5M/L NaCl和65uL CTAB/NaCl溶液，65℃溫育20min； ⑤用等體積的苯酚：氯仿：異戊醇（25：24：1）抽提1次，10，000g離心10min，取上清液移至干凈管中； ⑥將上清液，再加入等體積的氯仿：異戊醇（24：1）抽提1次； ⑦如水相與有機(jī)相之間仍有雜質(zhì)，再重復(fù)抽提過程； ⑧上清液中加入0.6倍體積的異丙醇沉淀DNA（-20℃放置1-2h），10,000g離心10min； ⑨取沉淀，加70%乙醇洗1遍； ⑩真空干燥后將DNA溶解在TE緩沖液（10mM Tris-HCl,pH7.5; 0.1mMEDTA中，-70℃保存）。 |
3樓2012-03-10 07:43:41
uuu555000
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