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lx19880717金蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
pET-28a原核不能表達(dá)目的蛋白 已有2人參與
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我在做原核表達(dá)的過(guò)程中，使用了pET-28a載體，Rosetta（DE3）表達(dá)菌株，但是37℃誘導(dǎo)表達(dá)后，連包涵體都沒(méi)有看到，基本沒(méi)有任何的蛋白表達(dá)，所以想請(qǐng)問(wèn)一下大家，能不能幫我分析一下是什么原因？謝謝。 PS：我的目的蛋白大量重復(fù)序列，是否是由于重復(fù)序列導(dǎo)致蛋白在表達(dá)過(guò)程中無(wú)法折疊，如果是這個(gè)原因有什么辦法可以解決，謝謝。 |
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zhiqiang5070
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2012-03-14 22:15:48
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2012-03-14 22:15:48
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我跟你一樣，也是用的PET28a，不過(guò)我用的菌是BL21。 1.你先到上游看看，是不是載體構(gòu)建的問(wèn)題；菌p，提質(zhì)粒酶切，測(cè)序看看。 2.上游沒(méi)問(wèn)題的話(huà)，改變誘導(dǎo)條件試試，T7lac啟動(dòng)子用IPTG1mM誘導(dǎo)6小時(shí)看看； 3你的菌有沒(méi)有問(wèn)題，可以把構(gòu)建的重組載體提出來(lái)轉(zhuǎn)化到新的感受態(tài)試試，我的問(wèn)題就是這么解決滴  4.換高濃度膠跑跑看看，高濃度提高分辨率。 |
4樓2012-03-14 17:49:04
2樓2012-03-12 16:58:46
lx19880717
金蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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3樓2012-03-12 20:33:16
5樓2012-03-14 20:00:21
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