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lx19880717金蟲 (初入文壇)
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[求助]
pET-28a原核不能表達目的蛋白 已有2人參與
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我在做原核表達的過程中，使用了pET-28a載體，Rosetta（DE3）表達菌株，但是37℃誘導表達后，連包涵體都沒有看到，基本沒有任何的蛋白表達，所以想請問一下大家，能不能幫我分析一下是什么原因？謝謝。 PS：我的目的蛋白大量重復序列，是否是由于重復序列導致蛋白在表達過程中無法折疊，如果是這個原因有什么辦法可以解決，謝謝。 |
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zhiqiang5070
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【答案】應助回帖
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http://gcua.schoedl.de/seqoverall.html 在線直接就可以分析 如果是稀有密碼子的問題 若不是特別嚴重可以通過選擇合適的宿主菌解決的。再有就是你關注一下你的酶切位點，是否導致你的目的片段的讀碼框是否發(fā)生移位。你也可以考慮你的誘導劑加入的濃度，但是一般的情況下不會是主要的原因。 |
8樓2012-04-06 15:12:09
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