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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 求基因敲除高手。。。。
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求基因敲除高手。。。。
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| 我基因敲除用的方法是同源重組，設計的上游同源臂測序之后發(fā)現(xiàn)有個別位點突變，請問影響基因敲除實驗嗎？會不會影響上游基因的表達？（上游基因的ORF與下游基因的ORF方向相同。） |
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9樓2013-11-07 10:18:56
★ ★ ★ ★
805085868(金幣+1): 謝謝參與
西瓜: 金幣+3, 回復很耐心啊~愚人節(jié)快樂O(∩_∩)O 2012-04-01 17:43:00
805085868(金幣+1): 謝謝參與
西瓜: 金幣+3, 回復很耐心啊~愚人節(jié)快樂O(∩_∩)O 2012-04-01 17:43:00
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首先想問你測序的方式是什么？PCR產(chǎn)物直接測還是連到載體上再測？測的是雙向還是單向？因為這些會影響測序結(jié)果的可信度。 其次，“個別位點突變”指的是只突變一個嗎？如果同源臂較長，估計是不影響重組實驗，但突變的位點會不會在重組體中那就不一定了，有機率在，也有機率不在�？梢訮CR包含上游同源臂的片斷測序驗證。 再次，如果篩選到的都有這個突變位點，會不會影響基因表達，要看突變的處于哪個位置。若在翻譯區(qū)，會不會造成移碼突變，若只是換了堿基，看蛋白序列改變了沒；若在非翻譯區(qū)，還在看是否改了啟動子RBS等等，大概就是這樣吧，說的不對的，請大家指正哈~ 愚人節(jié)快樂，不得不說小木蟲太有才啦^-^ |
3樓2012-04-01 01:40:52
5樓2012-04-01 21:54:52
6樓2012-04-02 12:29:38
簡單回復
2012-04-01 10:16
回復
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西瓜: 金幣-10, 違規(guī)存檔, 廣告 2012-04-01 17:43:19
西瓜: 編輯內(nèi)容 2012-04-01 17:43
-- [ Last edited by 西瓜 on 2012-4-1 at 17:43 ]
西瓜: 金幣-10, 違規(guī)存檔, 廣告 2012-04-01 17:43:19
西瓜: 編輯內(nèi)容 2012-04-01 17:43
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