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elbo金蟲(chóng) (小有名氣)
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PCR問(wèn)題求教
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擴(kuò)增細(xì)菌16S rDNA,通用引物，反應(yīng)體系25ul, 用TAKARA的premix，1ul模板（含量大于40ng/ul，每孔所用模板DNA不同），1.5ul引物（10umol/L）。擴(kuò)增條件，94預(yù)變性3min，94,52,72各1min，25循環(huán)，72延伸10min。1%凝膠檢測(cè)如下圖，最左側(cè)為不加模板的陰性對(duì)照.最右邊為Marker（第4個(gè)帶為1500bp）.為什么只有個(gè)別擴(kuò)增出來(lái)，而且怎么有這么多的引物二聚體？退后溫度低？還是模板含量太少？？ 請(qǐng)各位達(dá)人不吝賜教啊�。�  1% agarose |
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孫啟亮
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5樓2012-05-03 09:18:25
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2樓2012-05-02 20:20:26
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3樓2012-05-02 20:21:57
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4樓2012-05-03 05:52:17
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜: 金幣+2, Good！ 2012-05-04 18:43:45
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首先建議你先檢測(cè)一下模板。如果模板濃度沒(méi)有問(wèn)題，有可能是你引物的結(jié)合能力不是很好。還有不確定你的引物設(shè)計(jì)時(shí)是否驗(yàn)證過(guò)自身的配對(duì)等等。另外個(gè)人覺(jué)得你的循環(huán)數(shù)可以適當(dāng)增加，同時(shí)適當(dāng)減少每一步循環(huán)的時(shí)間。有些時(shí)候PCR的外界影響因素也很大。。。希望能幫的上你~~~另祝實(shí)驗(yàn)順利~~~ |
10樓2012-05-04 00:55:44
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