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紅樓隔雨金蟲 (初入文壇)
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[求助]
請(qǐng)教pNP法測(cè)定酯酶活性實(shí)驗(yàn)中的問(wèn)題 已有1人參與
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各位大俠，我最近要對(duì)某類細(xì)菌進(jìn)行酯酶活性測(cè)定的實(shí)驗(yàn)。由于之前沒(méi)有接觸過(guò)，對(duì)這一塊完全空白。我查過(guò)一些資料最后選擇用pNPA法來(lái)測(cè)定酯酶的活性。我的問(wèn)題是，我用Tris-HCl緩沖液溶解pNP作標(biāo)準(zhǔn)曲線，發(fā)現(xiàn)它很難溶，后來(lái)摸索發(fā)現(xiàn)用5%乙醇-Tris-HCl緩沖液可以配出溶液，于是就這么做出了標(biāo)準(zhǔn)曲線。但是到我 配制1mM pNPA溶液的時(shí)候，我再次發(fā)現(xiàn)，我用乙醇也溶解不了它（TAT）。 因?yàn)檫@時(shí)候再查了些資料，發(fā)現(xiàn)乙醇對(duì)酶活性有抑制，所以不敢用太高的濃度。 此外，我看過(guò)論壇的相關(guān)資料，發(fā)現(xiàn)有人說(shuō)可以用乳化劑來(lái)溶解pNPB，制成乳化液。但是具體怎么做沒(méi)有說(shuō)明，煩請(qǐng)知道的大俠講解一下~~ 還有我看到有人說(shuō)用酶標(biāo)儀來(lái)做這個(gè)實(shí)驗(yàn)，我一直都是用紫外分光光度計(jì)做的，請(qǐng)問(wèn)用酶標(biāo)儀做的話結(jié)果會(huì)準(zhǔn)一些嗎？反應(yīng)體積會(huì)不會(huì)太小了？ 先謝謝各位�。。�！ |
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淺笑微微
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2014-07-04 10:35:28
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