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麻煩大家給我分析一下電泳圖
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急�。。∵@是我新構(gòu)建的質(zhì)粒分別提取質(zhì)粒和酶切后跑的電泳，但是跑出來的帶很奇怪。這次提取的質(zhì)粒是直接從以前培養(yǎng)的平板上挑的單菌落，然后搖菌過夜，用TIGEN試劑盒提取的。之前已經(jīng)做過驗證結(jié)果都挺好的。由于我要將這個構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入革蘭氏陽性菌中，而最近轉(zhuǎn)了好幾批都沒轉(zhuǎn)進去，想知道出現(xiàn)這樣的結(jié)果是為什么? 這個是新提的質(zhì)粒做的酶切。1泳道是Marker，大小從下到上分別是：250-500-750-1000-1500-2000-2500-3000-3500-4000-5000-6000-8000-10000，2泳道是提取的質(zhì)粒，大小應(yīng)該是7100bp，3泳道是我酶切的結(jié)果，本來應(yīng)該是兩條帶，分別是2700bp和4500bp，但是卻切出來三條帶，這是為什么呀？ 這是我之前體制里做的酶切驗證，marker和前面的一樣。第3泳道是我酶切的結(jié)果。但是質(zhì)粒是我用自己配的堿裂解液提取的，所以下面有很亮的帶。我想知道用手提的質(zhì)粒做電轉(zhuǎn)老是轉(zhuǎn)不進去，會不會是因為受下面那個亮帶的影響。 |
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不鳴鳥
木蟲 (正式寫手)
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3樓2012-05-25 19:02:42
【答案】應(yīng)助回帖
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1.質(zhì)粒跑出來的電流明顯不對，http://wenku.baidu.com/view/e352aa868762caaedd33d4de.html你可以參考一下。 2.但是酶切圖中目的片斷都有，只是中間多了一道，或許是沒有切完全的質(zhì)粒。（用別的酶切一下，看看有沒有目的片斷） 3..會不會是污染了別的質(zhì)粒。以前構(gòu)建的質(zhì)粒有保存大腸桿菌宿主菌吧，建議重新劃線，再挑單菌落。后重新提質(zhì)粒�？梢蕴羧膫�同時做對比。 |
4樓2012-05-25 20:21:00
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