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[求助]
求助連接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒提取
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請(qǐng)教一下，在我連接轉(zhuǎn)化以后，菌液PCR能檢測(cè)到單一的目的條帶，但是隔日我提取質(zhì)粒卻提不出來了，我的載體5K，目的片段2k，但是質(zhì)粒提取是在750-1k之前有一片拖帶，沒有任何條帶，這是為什么呢？？ 另外，如何能夠提高質(zhì)粒提取的量？我用的是普通的質(zhì)粒小提試劑盒，我的提出來都在40ng/μl左右，但是人家都說能達(dá)到好幾百？請(qǐng)教。謝謝各位！ |
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2樓2012-06-04 15:41:32
3樓2012-06-04 18:38:13
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4樓2012-06-07 13:48:21
yanying198
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kenhtsjj: 金幣+2, ★有幫助, 我用的是熱激，這個(gè)操作應(yīng)該是沒有什么問題，再換盒子嘗試中~~~謝謝~ 2012-06-10 13:32:10
kenhtsjj: 金幣+1 2012-06-10 13:32:50
kenhtsjj: 金幣+2, ★有幫助, 我用的是熱激，這個(gè)操作應(yīng)該是沒有什么問題，再換盒子嘗試中~~~謝謝~ 2012-06-10 13:32:10
kenhtsjj: 金幣+1 2012-06-10 13:32:50
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菌落PCR有時(shí)候會(huì)產(chǎn)生假陽性。用熱激的方法轉(zhuǎn)化，效率應(yīng)該挺高的，我們一般是直接挑單克隆，然后提取質(zhì)粒，電泳驗(yàn)證。 提取質(zhì)粒最重要的是加溶液III，千萬不可以劇烈，否則質(zhì)粒會(huì)斷裂。個(gè)人想法，可以參考。 |
5樓2012-06-07 21:13:48
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