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cqyniu金蟲 (小有名氣)
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[求助]
測(cè)序正確的質(zhì)粒用SfiI酶切不動(dòng)，請(qǐng)問有什么相關(guān)文獻(xiàn)嗎
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| 測(cè)序正確的質(zhì)粒用SfiI酶切不動(dòng)，請(qǐng)問有什么相關(guān)文獻(xiàn)嗎？或者相關(guān)資料 |
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銀蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
cqyniu: 金幣+2 2012-06-08 10:44:49
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
cqyniu: 金幣+2 2012-06-08 10:44:49
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這個(gè)酶非常特別， 需要高的反應(yīng)溫度， 過夜培養(yǎng)。 1.特別要注意DNA的純度，一定要高。 2. 如果是在質(zhì)粒上， 應(yīng)該沒啥問題；如果是在PCR產(chǎn)物中， 要看看有沒有保護(hù)堿基。 3. 需要酶切過夜，用新酶。 4. 因?yàn)槭歉邷孛盖校?所以建議用個(gè)小管做酶切， 比如PCR管，因?yàn)槿绻?.5ml的EP管做酶切的話， 第二天， 你就會(huì)發(fā)現(xiàn)蓋子上， 有很多結(jié)晶水， 而底部的體積都蒸發(fā)到頂上去了。 這一點(diǎn)特別重要 |
7樓2012-06-05 11:12:55
gongeleven
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhaohq1209: 金幣+2, 貌似是一篇很有用的文獻(xiàn)哈~ 2012-06-05 08:37:16
cqyniu: 金幣+10 2012-06-05 09:53:03
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zhaohq1209: 金幣+2, 貌似是一篇很有用的文獻(xiàn)哈~ 2012-06-05 08:37:16
cqyniu: 金幣+10 2012-06-05 09:53:03
| SfiI requires two copies of its recognition sequence for cleavage to occur. The two sites can be on either the same or different DNA molecules. Wertzell L.M. et al., (1995) J. Mol. Biol. 248:581-595. |
2樓2012-06-04 18:39:02
jasco
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4樓2012-06-05 08:17:54
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