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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 瓊脂糖凝膠電泳的條帶問題
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瓊脂糖凝膠電泳的條帶問題
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PCR產物跑膠結果為什么會呈彌散狀，彌散后卻還有目的條帶（前四個是一種，后四個是另一種）。跑過兩次了都差不多。以為是退火溫度過低，這次的退火溫度從上次的60升到了65。還是如此，我的模板時cDNA我也跑了個膠，是圖中第二個Marker后面的，居然沒有條帶不知道是為什么。還請高手指點��！感激不盡。 |
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reallpf
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
rainwander: 金幣+5, MicEPI+1, 鼓勵新蟲交流 2012-07-17 17:51:45
感謝參與，應助指數(shù) +1
rainwander: 金幣+5, MicEPI+1, 鼓勵新蟲交流 2012-07-17 17:51:45
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PCR電泳后條帶彌散，一片亮帶的原因可能有： 1.模板不純 2.Buffer不合適 3.退火溫度偏低 4.酶量過多 5.dNTP、Mg 2+濃度偏高 6.循環(huán)次數(shù)過多 對策： 1.純化模板 2.更換Buffer 3.適當提高退火溫度 4.適量用酶 5.適當降低dNTP和鎂離子的濃度 6.減少循環(huán)次數(shù) 因為你的模版cDNA根本沒有跑出條帶，所以個人推測你的模板降解嚴重。因此建議你重新做出純的模板，分成幾份，常用的4度保存；其它-20度保存。 另外，造成你圖中所示的電泳結果還可能是電泳的問題，但這個可能性很小。 不過針對這點建議你跑電泳時常更換電泳液，防止核酸酶，雜DNA污染，另外控制好電泳的電壓，不要過大。還有你的PCR產物要放置4度，不要放室溫后再跑電泳。要么電泳結束馬上電泳，要么冰箱4度保存。 |
2樓2012-07-17 17:47:35
3樓2018-03-29 14:19:20
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