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[求助]
瓊脂糖凝膠電泳的條帶問(wèn)題
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PCR產(chǎn)物跑膠結(jié)果為什么會(huì)呈彌散狀，彌散后卻還有目的條帶（前四個(gè)是一種，后四個(gè)是另一種）。跑過(guò)兩次了都差不多。以為是退火溫度過(guò)低，這次的退火溫度從上次的60升到了65。還是如此，我的模板時(shí)cDNA我也跑了個(gè)膠，是圖中第二個(gè)Marker后面的，居然沒(méi)有條帶不知道是為什么。還請(qǐng)高手指點(diǎn)��！感激不盡。 |
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hsf1995
新蟲(chóng) (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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rainwander: 金幣+5, MicEPI+1, 鼓勵(lì)新蟲(chóng)交流 2012-07-17 17:51:45
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PCR電泳后條帶彌散，一片亮帶的原因可能有： 1.模板不純 2.Buffer不合適 3.退火溫度偏低 4.酶量過(guò)多 5.dNTP、Mg 2+濃度偏高 6.循環(huán)次數(shù)過(guò)多 對(duì)策： 1.純化模板 2.更換Buffer 3.適當(dāng)提高退火溫度 4.適量用酶 5.適當(dāng)降低dNTP和鎂離子的濃度 6.減少循環(huán)次數(shù) 因?yàn)槟愕哪０鎐DNA根本沒(méi)有跑出條帶，所以個(gè)人推測(cè)你的模板降解嚴(yán)重。因此建議你重新做出純的模板，分成幾份，常用的4度保存；其它-20度保存。 另外，造成你圖中所示的電泳結(jié)果還可能是電泳的問(wèn)題，但這個(gè)可能性很小。 不過(guò)針對(duì)這點(diǎn)建議你跑電泳時(shí)常更換電泳液，防止核酸酶，雜DNA污染，另外控制好電泳的電壓，不要過(guò)大。還有你的PCR產(chǎn)物要放置4度，不要放室溫后再跑電泳。要么電泳結(jié)束馬上電泳，要么冰箱4度保存。 |
2樓2012-07-17 17:47:35
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