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[求助]
過(guò)氧化氫酶CAT的測(cè)定問(wèn)題
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找到兩種方案看上去好像差不多但是感覺(jué)有差很大，請(qǐng)高手給看看哪種對(duì)： 第一種： 參照徐鏡波(1997)等方法。在室溫條件下，用 UV762 紫外光度計(jì)測(cè)定。參比池為 0.01mL 酶樣＋3.0mL 磷酸鹽緩沖液Ⅰ；樣品池為 0.01mL酶樣＋3.0mL H2O2-磷酸鹽緩沖液Ⅱ。采用波長(zhǎng) 250nm，1cm 石英比色皿，在 0~60s 內(nèi)每隔 5s 測(cè)定 H2O2吸光度，計(jì)算酶活性。定義 25℃下，100s 內(nèi)使過(guò)氧化氫分解 1/2 時(shí)的酶蛋白量為 1 個(gè) CAT 活性單位。 第二種： 反應(yīng)液配制：取200ml PBS（0.15M，pH7.0），加入0.3092ml 30%的H2O2（原液）搖勻即可。 （3）樣品測(cè)定：取3ml反應(yīng)液加入0.1ml（可視情況調(diào)整）酶液，以PBS為對(duì)照調(diào)零，測(cè)定OD240（紫外）（測(cè)定40s）。 第一種好像是測(cè)魚(yú)的，但是我們實(shí)驗(yàn)室一已經(jīng)畢業(yè)的師姐用這個(gè)測(cè)蠶豆的還發(fā)表文章了，我想問(wèn)問(wèn)測(cè)植物的是按第一種方法還是第二種方法好？是必須在240nm下測(cè)還是250nm也行？ |
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| 這兩種方法我感覺(jué)沒(méi)什么差別，我自己用的是類似第二種的方法，這個(gè)做法也是有可信的文獻(xiàn)出處的。面對(duì)這些方法差異，如果愿意深究，可以發(fā)掘一下最早對(duì)方法的報(bào)道以及一些改進(jìn)文章，分析機(jī)理，了解改進(jìn)原理，來(lái)作出判斷。如果圖省事，直接查查植物學(xué)幾個(gè)大雜志（如plant cell，plant J，plant phy， New phyto）上，已發(fā)表的文章檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)用什么方法，直接copy就行，這樣就算以后發(fā)SCI也不會(huì)有審稿人提出異議。 |
3樓2012-08-14 17:21:49
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你好 我在測(cè)水稻葉片的酶活 請(qǐng)問(wèn)如SOD、POD之類的酶活如何計(jì)算呢 是應(yīng)該用U/mg表示嗎，蛋白含量一定得測(cè)嗎？ 5樓2013-05-15 20:38:42
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