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萌主李萌萌銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助啊，有DNA濃度，沒有目的條帶
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P了好幾天沒有結(jié)果。。。 陽性對照檢驗(yàn)PCR體系沒有問題，覺得DNA沒提出來，今天換方法提了一次測濃度是74.57微克每毫升，P完之后又測濃度是10000多，可是電泳還是沒有條帶��！PS：陽性對照和我的目的片段差不多大，它卻出來了，請各位大神分析一下問題在哪里��？多謝了。。。  |
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gungunak47 
鐵蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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萌主李萌萌: 金幣+2, ★★★很有幫助, 謝謝你 2012-08-22 18:17:34
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1.DNA可能是降解了，可以先檢測一下DNA的質(zhì)量，只測濃度的話不能說明DNA的提取質(zhì)量，因?yàn)榻到獾腄NA濃度也會很高，電泳+數(shù)據(jù)才更能說明問題。 2.P完之后測的濃度時(shí)1000多，這也屬于正常，因?yàn)轶w系中有dNTIPs，還有DNA模板，測出來的濃度大也屬于正常。 3.只有數(shù)據(jù)+電泳圖才能說明問題，任何單獨(dú)一個(gè)都不是很能說明提取質(zhì)量。 |
2樓2012-08-21 15:44:28
【答案】應(yīng)助回帖
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萌主李萌萌: 金幣+1, ★★★很有幫助, 多謝高手指教~ 2012-08-22 18:18:04
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1、PCR后測DNA溶度是不太靠譜的，因?yàn)轶w系中有引物，dNTPs，還有模板，這都會導(dǎo)致你所測得溶度偏高。 2、可能的原因引物有問題，或試著去設(shè)置一個(gè)退火溫度；Mg離子溶度過低，使聚合酶的活性下降，產(chǎn)物減少。當(dāng)然，如果你的上樣量是是根據(jù)你測得DNA溶度而推出的話，建議你上樣時(shí)多上點(diǎn)。。。。。。 |
3樓2012-08-21 16:01:28
萌主李萌萌
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4樓2012-08-21 18:31:06
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8樓2012-08-23 10:02:26
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