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liuyu_sdili木蟲 (正式寫手)
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[求助]
【求助】急~~測序發(fā)現(xiàn)在引物位置發(fā)現(xiàn)一個(gè)堿基缺失
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表達(dá)一個(gè)蛋白，高保真酶PCR后克隆到載體上用載體引物測序，單向測完一個(gè)反應(yīng)后發(fā)現(xiàn)在引物中間位置有一個(gè)堿基缺失，請問這是什么原因？是引物有問題還是測序的問題？是否需要雙向測通？我現(xiàn)在還有一個(gè)克隆，對它進(jìn)行測序能夠得到正確結(jié)果嗎？現(xiàn)在需要表達(dá)的結(jié)果發(fā)文章畢業(yè)，真是急死人了 上峰圖，箭頭位置為缺失位置 測序峰圖 |
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haozi1989
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-08-27 13:45:01
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| 對于一個(gè)載體構(gòu)建，我一般都挑4個(gè)單克隆用10微升水稀釋，一半作菌落PCR。一般轉(zhuǎn)移到一個(gè)平板上生長。然后根據(jù)PCR結(jié)果，提取質(zhì)粒。一般我每次送兩個(gè)質(zhì)粒出去測序，而且一般都是雙向測序，這樣比較穩(wěn)妥。一般每次都能拿到一個(gè)理想的結(jié)果，雖然費(fèi)點(diǎn)錢，可是節(jié)約了時(shí)間，提高了效率，感覺還蠻好的。 |
4樓2012-08-26 06:16:20
mitocam
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