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[交流]
PRC出現(xiàn)大量非特異性條帶 已有8人參與
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| 做700多的PCR，出現(xiàn)的非特異性條帶比特異性的還亮，咋整呢…… |
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yaolinlshang
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2樓2012-08-28 15:21:57
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我也碰到過，排除了很多問題，最終也沒找到確切的原因，最后還是無奈換了引物，就沒問題了。由此分析應(yīng)該還是引物本身的問題，或者多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，或者非特異結(jié)合，也可能是引物自身出現(xiàn)多聚。我也對PCR結(jié)果進(jìn)行了測序，就使用了PCR引物，但是測序公司說不能結(jié)合測不出來。我對這個(gè)問題也非常好奇，如果你能找到原因，一定要告訴我呵呵。 目前看來要想解決問題，最有效的還是直接更換引物。 |
3樓2012-08-28 15:36:28
4樓2012-08-28 16:02:03
lidonghong
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9樓2012-08-31 09:56:16
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樓主給的條件太少，起碼把你的電泳圖貼一下，PCR條件，引物等等.另外非特異性條帶出現(xiàn)的原因有很多，下面給你列舉一下，你可以逐一排除. 原因： 1.引物特異性差 2.模板或引物濃度過高 3.酶量過多 4.Mg2+濃度偏高 5.退火溫度偏低 6.循環(huán)次數(shù)過多 對策： 1.重新設(shè)計(jì)引物或者使用巢式PCR 2.適當(dāng)降低模板或引物濃度 3.適當(dāng)減少酶量 4.降低鎂離子濃度 5.適當(dāng)提高退火溫度或使用二階段溫度法 6.減少循環(huán)次數(shù) PS：祝樓主實(shí)驗(yàn)順利.  |
10樓2012-08-31 11:31:34
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