 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 29 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2551 | 回復(fù): 28 | |||
barrey鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
|
[交流]
請(qǐng)教一個(gè)PCR產(chǎn)物直接酶切的問(wèn)題
|
||
|
本人最近做PCR產(chǎn)物直接酶切來(lái)驗(yàn)證某個(gè)基因SNP的差異，野生型中含有可以酶切的一個(gè)位點(diǎn)，突變型中不含有酶切位點(diǎn)，PCR反應(yīng)用全式金的Eco Taq Mix擴(kuò)增的，片段大小為859bp，見(jiàn)附圖中的1,2，3，9,10泳道，限制性內(nèi)切酶用的不常用的Hpy99I(NEB),PCR產(chǎn)物沒(méi)有過(guò)柱回收，連續(xù)做了好幾次，用野生型的PCR產(chǎn)物酶切后均沒(méi)有任何條帶，今天酶切條件是25uL體系，2U酶，加了BSA,以第10泳道的PCR產(chǎn)物5uL作為模板酶切（昨天分別做了10uL和15uL的模板濃度，均無(wú)酶切條帶，所以推測(cè)不是模板濃度的問(wèn)題），酶切結(jié)果在第十一泳道，什么條帶都沒(méi)有。 另外，由于該P(yáng)CR產(chǎn)物中有單一的HindIII酶切位點(diǎn)，因此選擇HindIII作為陽(yáng)性對(duì)照，做了平行的酶切反應(yīng)，酶切結(jié)果見(jiàn)泳道4-8. 請(qǐng)問(wèn)導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因是什么，謝謝。 PCR產(chǎn)物酶切.jpg [ Last edited by barrey on 2012-9-3 at 07:38 ] |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
求材料調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
085600材料與化工
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
085600材料與化工調(diào)劑 324分
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
286求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
焦慮
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
344求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
266求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
化學(xué)工程321分求調(diào)劑
已經(jīng)有18人回復(fù)
-
314求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
08工科 320總分 求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 雙酶切問(wèn)題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 請(qǐng)教一個(gè)關(guān)于測(cè)序結(jié)果的問(wèn)題
已經(jīng)有19人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物經(jīng)酶切電泳后所得的基因型與測(cè)序結(jié)果不一致，是何原因？該如何處理？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物凝膠回收、酶切等問(wèn)題請(qǐng)教
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 載體連接pcr片段一直連不上
已經(jīng)有17人回復(fù)
- PCR ， 雙酶切，連接問(wèn)題
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 做一個(gè)克隆所需的最短時(shí)間？比比誰(shuí)更高效快速！
已經(jīng)有39人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物酶切檢測(cè)不到東西是為什么
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒DNA可以不通過(guò)酶切直接跑電泳檢測(cè)嗎？
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR產(chǎn)物測(cè)序總是不對(duì)
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR引物設(shè)計(jì)出來(lái)了，但酶切之后電泳沒(méi)條帶啊
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】pcr,酶切，連接，哪步可以省？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 克隆基因全長(zhǎng)引物設(shè)計(jì)問(wèn)題
已經(jīng)有32人回復(fù)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
上海交大化院功能大分子團(tuán)隊(duì)招2026年碩士、聯(lián)培、博士后
+1/37
-
上海交通大學(xué)沈道智副教授招收2026年聯(lián)培博士/碩士研究生（微納器件與制造方向）
+1/33
-
華南師范大學(xué)（211）申請(qǐng)審核制博士招生- 電子、自動(dòng)化、機(jī)械、生物學(xué)、物理相關(guān)專(zhuān)業(yè)
+1/25
-
【預(yù)碩】【預(yù)博】青島大學(xué)生物醫(yī)藥創(chuàng)新轉(zhuǎn)化
+1/16
-
軍科某研究院接收調(diào)劑研究生
+1/15
-
歡迎生物與醫(yī)藥、藥學(xué)、化學(xué)等相關(guān)專(zhuān)業(yè)的同學(xué)
+1/11
-
遼寧工程技術(shù)大學(xué)力學(xué)與工程學(xué)院招收調(diào)劑
+1/10
-
新加坡國(guó)立大學(xué)藥學(xué)系化學(xué)生物學(xué)課題組招PhD
+1/9
-
【博士招生】武漢科技大學(xué)招收材料、化工、環(huán)境、冶金類(lèi)2026年“申請(qǐng)-考核”制博士生
+1/8
-
上海科技大學(xué)招收有機(jī)化學(xué)方向招收2026級(jí)工程博士
+1/6
-
福州大學(xué)國(guó)家級(jí)人才湯育欣教授課題組2026年招收”申請(qǐng)考核制“儲(chǔ)能電池方向博士研究生
+1/6
-
211/雙一流石河子大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院--電催化，CO2轉(zhuǎn)化
+1/6
-
中科院上海微系統(tǒng)所材料生長(zhǎng)理論與仿真課題組-博士后招聘（材料計(jì)算與AI4S）
+1/6
-
2026考研的同學(xué)，分?jǐn)?shù)不夠？想調(diào)劑上岸的同學(xué)，來(lái)看
+1/5
-
招收化工與材料學(xué)科點(diǎn)研究生
+1/5
-
東北林業(yè)大學(xué)（211，雙一流）宋老師課題組招收高分子、化學(xué)、復(fù)合材料等方向研究生
+1/4
-
北京高校副校長(zhǎng)團(tuán)隊(duì)招收機(jī)械類(lèi)，環(huán)境類(lèi)學(xué)碩和專(zhuān)碩
+1/3
-
澳大利亞科學(xué)院院士Prof.Gordon Wallace, University of Wollongong 全獎(jiǎng)博士機(jī)會(huì)
+1/1
-
北京大學(xué)環(huán)境學(xué)院張子帥研究員招收科研助理
+1/1
-
北京高校副校長(zhǎng)團(tuán)隊(duì)招收機(jī)械類(lèi)，環(huán)境類(lèi)學(xué)碩和專(zhuān)碩
+1/1
137167741
至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- BioEPI: 2
- 應(yīng)助: 92 (初中生)
- 貴賓: 0.04
- 金幣: 11521
- 帖子: 1609
- 在線: 1116.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 477732
2樓2012-08-28 20:42:21
★ ★ ★
barrey(金幣+1): 謝謝參與
yqbter: 金幣+2, 不錯(cuò)的回答！ 2012-08-29 17:45:16
barrey(金幣+1): 謝謝參與
yqbter: 金幣+2, 不錯(cuò)的回答！ 2012-08-29 17:45:16
|
第一個(gè)問(wèn)題：第11泳道完全沒(méi)有條帶，即使沒(méi)有切開(kāi)也不應(yīng)看不到條帶，是否酶切底物太少？（該問(wèn)題很重要） 以下僅供參考： 1、Eco Taq Mix是否高保真，你的PCR過(guò)程高保真很重要 2、Hpy99II 不常用，最好認(rèn)真研究下該酶的特性(限制性位點(diǎn)、最適溫度等) 3、最好純化下PCR產(chǎn)物，否則會(huì)影響酶的效率 |
17樓2012-08-29 08:59:18
zhoubaibin
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 3460.5
- 帖子: 782
- 在線: 20.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1724689
10樓2012-08-29 06:23:20
鳳凰-涅磐
金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 50 (小學(xué)生)
- 金幣: 779.3
- 帖子: 2963
- 在線: 462小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1903667
12樓2012-08-29 07:36:06
irenescbg
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 7 (幼兒園)
- 金幣: 1673.8
- 帖子: 89
- 在線: 24.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1947397
16樓2012-08-29 08:52:28
zoelxx
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 5445.2
- 帖子: 502
- 在線: 672.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1317010
20樓2012-08-30 08:35:02
21樓2012-08-31 21:45:31
★
barrey(金幣+1): 謝謝參與
barrey(金幣+1): 謝謝參與
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
22樓2012-08-31 21:57:32
barrey
鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 5561.2
- 帖子: 574
- 在線: 88.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 285824
26樓2012-09-03 07:37:49
簡(jiǎn)單回復(fù)
2012-08-28 21:34
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
2012-08-28 21:41
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
xachenxi5樓
2012-08-28 21:46
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
2012-08-28 22:00
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
2012-08-28 22:29
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
2012-08-28 22:48
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
2012-08-29 05:23
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
userhung11樓
2012-08-29 07:09
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
應(yīng)用人生13樓
2012-08-29 07:38
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
zhoucb14樓
2012-08-29 07:49
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
yanzongwei15樓
2012-08-29 08:17
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
Ayse18樓
2012-08-29 11:29
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
氫化大雪19樓
2012-08-29 22:02
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
hengab23樓
2012-08-31 22:05
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
秋之落葉24樓
2012-08-31 23:02
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
木米月厷25樓
2012-08-31 23:23
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
20091262227樓
2012-09-03 08:23
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
祝福
lifuqiang928樓
2012-09-03 09:13
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
zfj2011060329樓
2013-05-30 14:52
回復(fù)
barrey(金幣+1): 謝謝參與
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 barrey 的主題更新
| 29 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[教師之家] 焦慮 +8 | 水冰月月野兔 2026-03-13 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +5 | knight344 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 271材料工程求調(diào)劑
+3
|
.6lL 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿985，本科211，0817化學(xué)工程與技術(shù)319求調(diào)劑 +6 | Liwangman 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 總分331 +3 | ZY-05 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 26博士申請(qǐng) +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +5 | 大口吃飯 身體健 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +8 | 一定有學(xué)上- 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +4 | 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +3 | 劉夢(mèng)微 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 294求調(diào)劑 +3 | Zys010410@ 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料工程327求調(diào)劑 +3 | xiaohe12w 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 297一志愿上交085600求調(diào)劑 +5 | 指尖八千里 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，材料專(zhuān)碩317求調(diào)劑 +5 | lx8568 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 芬達(dá)46 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +5 | 超級(jí)伊昂大王 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿211化學(xué)學(xué)碩310分求調(diào)劑 +8 | 努力奮斗112 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考博] 福州大學(xué)楊黃浩課題組招收2026年專(zhuān)業(yè)學(xué)位博士研究生，2026.03.20截止 +3 | Xiangyu_ou 2026-03-12 | 3/150 |
|