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畢赤酵母電轉(zhuǎn)化問題求助
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我的電轉(zhuǎn)步驟如下，但不知道是否有問題，涂到MD板上兩天了，也沒有長出來，請各位大俠幫我看看，謝謝 1. 感受態(tài)的制備：過夜培養(yǎng)的OD =1.4，取25ml離心---用25ml冰浴滅菌水重懸離心---用12.5ml冰浴滅菌水重懸離心----用2ml冰浴1M山梨醇重懸離心-------用500微升1M山梨醇重懸80微升分裝----負(fù)80備用 2.質(zhì)粒線性化：測序正確的質(zhì)粒用SacI每期峨眉線性化------DNA直接回收試劑盒回收------用BAP去磷酸化試劑盒去磷酸化-------跑膠回收，用25微升TE洗脫，濃度大約為30ng/ul 3.電轉(zhuǎn)化：用伯樂的電轉(zhuǎn)移，按照儀器自身的畢赤酵母的電轉(zhuǎn)參數(shù)進(jìn)行，用的0.2的電轉(zhuǎn)杯 4.電轉(zhuǎn)后30℃靜置1-2h，取200ul涂板；還有兩個(gè)是把電轉(zhuǎn)液1500g離心30s棄上清，沉淀混勻涂板 但兩天了都沒有東西長出來，不知道是不是哪兒出問題了，請指教 |
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