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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 畢赤酵母電轉化問題求助
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[求助]
畢赤酵母電轉化問題求助
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我的電轉步驟如下，但不知道是否有問題，涂到MD板上兩天了，也沒有長出來，請各位大俠幫我看看，謝謝 1. 感受態(tài)的制備：過夜培養(yǎng)的OD =1.4，取25ml離心---用25ml冰浴滅菌水重懸離心---用12.5ml冰浴滅菌水重懸離心----用2ml冰浴1M山梨醇重懸離心-------用500微升1M山梨醇重懸80微升分裝----負80備用 2.質粒線性化：測序正確的質粒用SacI每期峨眉線性化------DNA直接回收試劑盒回收------用BAP去磷酸化試劑盒去磷酸化-------跑膠回收，用25微升TE洗脫，濃度大約為30ng/ul 3.電轉化：用伯樂的電轉移，按照儀器自身的畢赤酵母的電轉參數進行，用的0.2的電轉杯 4.電轉后30℃靜置1-2h，取200ul涂板；還有兩個是把電轉液1500g離心30s棄上清，沉淀混勻涂板 但兩天了都沒有東西長出來，不知道是不是哪兒出問題了，請指教 |
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 酵母表達純化一站式解決！ | 【分子生物】EPI帖 |
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4755024114樓2012-09-16 22:51:59
2樓2012-09-15 20:44:10
3樓2012-09-16 09:52:06
5樓2012-09-17 09:09:49
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