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20111987金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
熒光定量PCR結(jié)果如何處理
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| 大家好，我剛做完一批熒光定量PCR，結(jié)果如附件所示，但是，結(jié)果該如何處理，多種不懂啊，得到的數(shù)據(jù)各平行之間重復(fù)性不好，可能原因會(huì)有哪些？對(duì)照組和處理組結(jié)果之間的差異是否顯著怎么確定？請(qǐng)各位大俠幫忙看一下，謝謝！ |
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2012-10-05 10:22:21, 14.5 K
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 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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mamadexiao
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-10-06 17:05:56
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前提：目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100％且偏 差在 5％以內(nèi) 1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值： ΔCT（test)= CT （target,test) - CT （ref,test) ΔCT（calibrator)= CT （target, calibrator) - CT （ref, calibrator) 2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值： ΔΔCT= ΔCT（test) - ΔCT（calibrator) 3、計(jì)算表達(dá)水平比率： 2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值 |
2樓2012-10-05 10:47:50
20111987
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3樓2012-10-05 15:42:01
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4樓2012-10-05 15:43:19
mamadexiao
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-10-06 17:06:11
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有沒(méi)有好好念過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)啊，每個(gè)處理一個(gè)樣，你怎么做統(tǒng)計(jì)啊，還是說(shuō)你的每個(gè)處理其實(shí)就是一個(gè)平行樣》？？？ 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，我們實(shí)驗(yàn)室要求每次3個(gè)復(fù)孔，然后平行做3-4次 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，我們用的近交系的，所以一般做2-3次，最好做3次以上，每次每組4-6只老鼠 這樣才能做統(tǒng)計(jì) 一般一個(gè)樣是不做統(tǒng)計(jì)的，就是看個(gè)趨勢(shì) |
5樓2012-10-05 20:54:14
mamadexiao
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擴(kuò)增效率20% 呃 這個(gè)。。。 你的細(xì)胞表達(dá)這個(gè)基因么 你確定么？ 還有，就是你的MIX加了么。。。 有的時(shí)候，由于我們做realtime的時(shí)候，用的體系比較小，可能有的時(shí)候忘記加了。就擴(kuò)增不起來(lái)了。。。 還有，我們做realtime的時(shí)候，一般每個(gè)樣，都會(huì)做1-2個(gè)技術(shù)重復(fù)的。就是每次都有2-3個(gè)孔是一個(gè)樣的，一模一樣的東西，然后，一起看這個(gè)擴(kuò)增情況的，把手抖啊什么的，都可以去掉的。。。 |
6樓2012-10-05 20:58:04
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8樓2012-10-06 08:17:22
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當(dāng)然用統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)看結(jié)果啦。Excell也可以簡(jiǎn)單統(tǒng)計(jì) 9樓2012-10-06 09:39:21
mamadexiao
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20111987: 金幣+10, ★有幫助 2012-10-08 07:50:30
20111987: 金幣+10, ★有幫助 2012-10-08 07:50:30
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一般我們生物學(xué)上用的是P<0.05 or 0.01或者人家還有自己定的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn) 至于具體的，麻煩你自己看看統(tǒng)計(jì)學(xué)的書(shū)吧，因?yàn)閷?duì)象不同，分組不同，選擇的統(tǒng)計(jì)方法也不一樣。 好好學(xué)下統(tǒng)計(jì)學(xué)吧，別說(shuō)自己不懂。。。 什么都是自己學(xué)的。 圖書(shū)館就有書(shū)，沒(méi)書(shū)，網(wǎng)上找，總能找到的。 不是不愿意教你，而是，這個(gè)東西，你總不能每次都把數(shù)據(jù)扔這讓小木蟲(chóng)的人給你統(tǒng)計(jì)分析吧。。。 |
10樓2012-10-06 21:55:57
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