 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2084 | 回復(fù): 37 | ||
[求助]
求助-4Kb的基因P不出來
|
|
有一個4Kb的基因，我需要把它P出來然后夠載體，用cDNA二鏈為模板，混合酶、rTaq、LA Taq、pfu等酶都試過了，退火溫度也做過梯度，還有，分成兩段進(jìn)行拼接的方法也用過，都是P不出來。請各位大蝦指點(diǎn)一二，不甚感激��！ [ Last edited by 1949stone on 2012-10-23 at 07:50 ] |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有79人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 【求助】用cDNA的ORF序列以基因組DNA為模板 做PCR 為何P不出其對應(yīng)的基因組序列?
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 重金求助基因克隆與功能驗(yàn)證方向 中文摘要350字左右翻譯成英語 急！ 急！ 急！在線等
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 菜鳥求助——著急求助解答：在NCBI上為什么下載不了FASTA格式的基因序列
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 求助基因在不同發(fā)育時期表達(dá)的數(shù)據(jù)怎樣用spss分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求助 酶的功能基因中如何根據(jù)片段基因得到全段序列~急
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】目的基因與pPIC9K連接的問題！
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒跟目的基因連接不上怎么辦
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】基因序列不同，氨基酸序列相同
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】基因克隆時，酶切有結(jié)果，PCR卻P不出來
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】目的基因連接表達(dá)載體后涂板不長菌
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】基因組PCR老P不出目的帶
已經(jīng)有39人回復(fù)
- 【求助/交流】用SMART技術(shù)得到一個基因的5‘ RACE后，是不是就知道該基因的轉(zhuǎn)錄起始位
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】只知道基因功能，但不知序列位置，怎樣克隆目的基因
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】RNA的提取問題和qRT-PCR分析基因在不同時間的定量表達(dá)
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助】大家能不能推薦幾個國外做基因轉(zhuǎn)染（藥物控釋）的牛人？（呵呵，回帖就送~）
已經(jīng)有39人回復(fù)
gwd0312
木蟲 (正式寫手)
“無冕之王”
- MolEPI: 5
- 應(yīng)助: 131 (高中生)
- 金幣: 1973.2
- 紅花: 10
- 帖子: 418
- 在線: 88.3小時
- 蟲號: 1067565
- 注冊: 2010-08-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 質(zhì)譜分析
2樓2012-10-18 10:17:59
hj890509
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 1242.6
- 散金: 77
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 321
- 在線: 214.5小時
- 蟲號: 2015316
- 注冊: 2012-09-20
- 性別: MM
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
3樓2012-10-18 10:45:26
4樓2012-10-18 10:57:56
吳勁松
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 14.4
- 帖子: 12
- 在線: 12.1小時
- 蟲號: 2069536
- 注冊: 2012-10-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
5樓2012-10-18 11:39:56
hj890509
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 1242.6
- 散金: 77
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 321
- 在線: 214.5小時
- 蟲號: 2015316
- 注冊: 2012-09-20
- 性別: MM
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
昺昺: 金幣+3, ★★★很有幫助 2012-10-18 15:23:25
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應(yīng)助 2012-10-18 18:54:02
昺昺: 金幣+3, ★★★很有幫助 2012-10-18 15:23:25
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應(yīng)助 2012-10-18 18:54:02
|
采用的是重疊延伸PCR，有些片段是通過兩輪PCR擴(kuò)增，目的是為了增加重疊區(qū)域的長度，例如， 擴(kuò)增GH片段， 第一輪擴(kuò)增所用條件和體系為 模板（cDNA擴(kuò)增后的片段） 1ul GHu1 1ul GHd1 1ul 10*buffer 5ul dNTP 4ul Taq plus 0.5ul H2O 37.5ul GH片段PCR擴(kuò)增條件為: 94 ℃ 預(yù)變性 5min、94 ℃變性30 s、60 ℃退火30 s、72 ℃延伸2min30s、72 ℃最后一輪 10min、進(jìn)行30 循環(huán) 。（GH片段大約為2.5kb) 第二輪擴(kuò)增條件和體系完全相同，除過模板用第一輪擴(kuò)增出來的為模板， 我們剛開始時候也擴(kuò)不出來經(jīng)過分析進(jìn)行調(diào)整模板濃度、比例以及PCR條件都摸索了好長時間，之后經(jīng)過分析之后，問題可能是：①DG片段的濃度過低，于是，重新擴(kuò)增DG片段，并用少量的TE回收，目的是為了提高DG的濃度。②PCR程序可能需要進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。于是，根據(jù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，對基因片段的濃度進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整，并對PCR的程序進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)。即實(shí)驗(yàn)——反饋、改進(jìn)——再實(shí)驗(yàn)的過程。 |
6樓2012-10-18 12:03:32
7樓2012-10-18 12:22:01
植物園園長
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 11 (小學(xué)生)
- 金幣: 667.5
- 帖子: 78
- 在線: 139.1小時
- 蟲號: 882949
- 注冊: 2009-10-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物進(jìn)化生物學(xué)
8樓2012-10-18 16:15:57
植物園園長
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 11 (小學(xué)生)
- 金幣: 667.5
- 帖子: 78
- 在線: 139.1小時
- 蟲號: 882949
- 注冊: 2009-10-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物進(jìn)化生物學(xué)
9樓2012-10-18 16:18:25
10樓2012-10-18 16:57:35
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 昺昺 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求材料調(diào)劑 +8 | 隔壁陳先生 2026-03-12 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +3 | 小材化本科 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +3 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +8 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
[考博] 26博士申請 +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +8 | 一定有學(xué)上- 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩326求調(diào)劑 +6 | 墨煜姒莘 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 26考研求調(diào)劑 +6 | 丶宏Sir 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +4 | 太陽花天天開心 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | Yy7400 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3 | 藥學(xué)chy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請]
今年的國基金是打分制嗎？
 50+3
|
zhanghaozhu 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 0703方向310分求調(diào)劑 +3 | 努力奮斗112 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 東華理工大學(xué)化材專業(yè)26屆碩士博士申請 +6 | zlingli 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070305求調(diào)劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料080500調(diào)劑求收留 +3 | 一顆meteor 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 308 085701 四六級已過求調(diào)劑 +7 | 溫喬喬喬喬 2026-03-12 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 26調(diào)劑/材料科學(xué)與工程/總分295/求收留 +9 | 2026調(diào)劑俠 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +3 | d如愿上岸 2026-03-13 | 3/150 |
|