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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 多個基因共表達純化問題
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[求助]
多個基因共表達純化問題
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請教共表達兩個基因以及表達后如何純化。具體為 兩個基因都有完整閱讀框，之間加有rbs，如何連接到pet28，能實現(xiàn)共表達嗎？ 另外，就是如果共表達了，第一個蛋白可以利用載體的His標簽純化，那第二個也能純化嗎？如果不能，是不是應該在它前面加上His標簽呢？ |
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xiangquanju
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首先樓主要明白共表達的目的是什么，有些是為了研究蛋白之間的相互作用，有些是為了保證蛋白的正確折疊，需要供表達另外一個蛋白 共表達可以選擇共表達載體（progema公司有很多），把不同的基因插入到不同的多克隆位點。一般只會在其中一個基因上插入一個純化標簽，然后通過蛋白質之間的相互作用純化將另外一個蛋白也純化了。 如果樓主擔心標簽最蛋白的活性有影響，可以在蛋白與標簽之間加入一個蛋白酶酶切位點，如TEV，純化之后用這個蛋白酶切除標簽就可以了 |
8樓2012-12-01 20:42:49
2樓2012-11-29 11:43:58
susizheng
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1、連接的話，先連接A基因到pet28，B基因借助另外一個載體，連接后，擴增RBS-B基因進行第二次連接； 2、T7啟動子共表達兩個基因沒問題。 3、共表達主要是做催化用的，做純化沒必要共表達吧。分開表達純化不是更好？ 如果確實像同時純化也行，在擴增第二個基因的引物上加上his標簽就行。 |
3樓2012-11-29 13:55:08
4樓2012-11-29 15:04:24
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