 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 多個基因共表達純化問題
| 查看: 1471 | 回復: 15 | ||
[求助]
多個基因共表達純化問題
|
||
|
請教共表達兩個基因以及表達后如何純化。具體為 兩個基因都有完整閱讀框，之間加有rbs，如何連接到pet28，能實現(xiàn)共表達嗎？ 另外，就是如果共表達了，第一個蛋白可以利用載體的His標簽純化，那第二個也能純化嗎？如果不能，是不是應該在它前面加上His標簽呢？ |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有254人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復
-
化學工程，本211，求調劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調劑
已經(jīng)有0人回復
-
湖北師范大學招調劑啦
已經(jīng)有3人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 基因克隆表達中信號肽的問題
已經(jīng)有11人回復
- 線粒體基因控制區(qū)CR含重復序列，為什么PCR產物直接測序不準，而要純化或者克隆再測序
已經(jīng)有12人回復
- 關于基因超表達的影響
已經(jīng)有5人回復
- 畢赤表達一酶基因，跑蛋白電泳只有一條帶，是不是不用純化了呀
已經(jīng)有10人回復
- 相對定量測基因相對表達量，急啊�。。�
已經(jīng)有4人回復
- 知道一個基因在花中表達量高有什么用？
已經(jīng)有13人回復
- 構建pBI121表達載體，目的基因與載體連接不上
已經(jīng)有54人回復
- 求助：關于基因表達調控機制的問題
已經(jīng)有9人回復
- 【Journal Club】第3講 水稻全基因組基因網(wǎng)絡生物信息學平臺的建立
已經(jīng)有33人回復
- 關于基因表達量下調的問題
已經(jīng)有3人回復
- 真核生物基因在大腸中表達 問題
已經(jīng)有4人回復
- 誠招有分子生物學及蛋白質表達純化背景的博士一年級同學到美國來做抗體engineering
已經(jīng)有16人回復
- 【求助/交流】原核表達羊基因，cDNA長度約為3kb，基因為一種有活性的酶
已經(jīng)有15人回復
- 【求助/交流】原核表達蛋白純化
已經(jīng)有29人回復
- 【求助/交流】有關蛋白純化及其基因克隆的問題！請大家?guī)椭?/a>
已經(jīng)有10人回復
- 引物設計求助~
已經(jīng)有13人回復
- 基因帶六個his標簽，蛋白純化時為何掛不上鎳柱
已經(jīng)有26人回復
xiangquanju
金蟲 (小有名氣)
- 應助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1519.7
- 散金: 245
- 紅花: 1
- 帖子: 295
- 在線: 153.2小時
- 蟲號: 999190
- 注冊: 2010-04-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學
12樓2012-12-03 13:18:01
2樓2012-11-29 11:43:58
susizheng
木蟲 (著名寫手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 應助: 130 (高中生)
- 貴賓: 0.008
- 金幣: 4738.3
- 散金: 2273
- 紅花: 56
- 帖子: 2308
- 在線: 740.7小時
- 蟲號: 642666
- 注冊: 2008-11-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 有機合成
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
coh2lxx: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-11-29 15:04:35
coh2lxx: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-11-29 20:47:18
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應助 2012-12-03 16:35:52
感謝參與，應助指數(shù) +1
coh2lxx: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-11-29 15:04:35
coh2lxx: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-11-29 20:47:18
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應助 2012-12-03 16:35:52
|
1、連接的話，先連接A基因到pet28，B基因借助另外一個載體，連接后，擴增RBS-B基因進行第二次連接； 2、T7啟動子共表達兩個基因沒問題。 3、共表達主要是做催化用的，做純化沒必要共表達吧。分開表達純化不是更好？ 如果確實像同時純化也行，在擴增第二個基因的引物上加上his標簽就行。 |
3樓2012-11-29 13:55:08
4樓2012-11-29 15:04:24
5樓2012-11-29 15:12:45
susizheng
木蟲 (著名寫手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 應助: 130 (高中生)
- 貴賓: 0.008
- 金幣: 4738.3
- 散金: 2273
- 紅花: 56
- 帖子: 2308
- 在線: 740.7小時
- 蟲號: 642666
- 注冊: 2008-11-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 有機合成
6樓2012-11-29 15:57:17
7樓2012-11-29 20:46:27
xiangquanju
金蟲 (小有名氣)
- 應助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1519.7
- 散金: 245
- 紅花: 1
- 帖子: 295
- 在線: 153.2小時
- 蟲號: 999190
- 注冊: 2010-04-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
coh2lxx: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-12-02 09:22:19
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應助 2012-12-03 16:36:05
感謝參與，應助指數(shù) +1
coh2lxx: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-12-02 09:22:19
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應助 2012-12-03 16:36:05
|
首先樓主要明白共表達的目的是什么，有些是為了研究蛋白之間的相互作用，有些是為了保證蛋白的正確折疊，需要供表達另外一個蛋白 共表達可以選擇共表達載體（progema公司有很多），把不同的基因插入到不同的多克隆位點。一般只會在其中一個基因上插入一個純化標簽，然后通過蛋白質之間的相互作用純化將另外一個蛋白也純化了。 如果樓主擔心標簽最蛋白的活性有影響，可以在蛋白與標簽之間加入一個蛋白酶酶切位點，如TEV，純化之后用這個蛋白酶切除標簽就可以了 |
8樓2012-12-01 20:42:49
9樓2012-12-02 09:27:54
xiangquanju
金蟲 (小有名氣)
- 應助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1519.7
- 散金: 245
- 紅花: 1
- 帖子: 295
- 在線: 153.2小時
- 蟲號: 999190
- 注冊: 2010-04-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學
10樓2012-12-02 10:33:57
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 coh2lxx 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 環(huán)境工程 085701，267求調劑 +7 | minht 2026-03-29 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 287求調劑 +14 | land xuxu 2026-03-26 | 14/700 |
|
|
[考研] 求調劑 +10 | 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料科學與工程調劑 +8 | 深V宿舍吧 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085701求調劑初試286分 +5 | secret0328 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 348求調劑 +6 | 小懶蟲不懶了 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +10 | 張zz111 2026-03-27 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 349求調劑 +6 | 李木子啊哈哈 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥調劑 +5 | Feisty。 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0703化學調劑，求導師收 +9 | 天天好運來上岸?/a> 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 調劑 +3 | 好好讀書。 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學求調劑，各位老師看看我�。。� +5 | 祁祺祺 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856調劑 +5 | 求求讓我有書讀?/a> 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分，求調劑 +9 | 大饞小子 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[論文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 | Russ_ss 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學一志愿南京師范大學303求調劑 +3 | zzffylgg 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 機械學碩310分，數(shù)一英一，一志愿211本科雙非找調劑信息 +3 | @357 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 打過很多競賽，085406控制工程300分，求調劑 +3 | askeladz 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)院校調劑 +4 | 周56 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 085404電子信息284分求調劑
+4
|
13659058978 2026-03-24 | 4/200 |
|