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[求助]
多個(gè)基因共表達(dá)純化問題
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請(qǐng)教共表達(dá)兩個(gè)基因以及表達(dá)后如何純化。具體為 兩個(gè)基因都有完整閱讀框，之間加有rbs，如何連接到pet28，能實(shí)現(xiàn)共表達(dá)嗎？ 另外，就是如果共表達(dá)了，第一個(gè)蛋白可以利用載體的His標(biāo)簽純化，那第二個(gè)也能純化嗎？如果不能，是不是應(yīng)該在它前面加上His標(biāo)簽?zāi)兀? |
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9樓2012-12-02 09:27:54
2樓2012-11-29 11:43:58
susizheng
木蟲 (著名寫手)
我們是糖 甜到憂傷
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【答案】應(yīng)助回帖
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1、連接的話，先連接A基因到pet28，B基因借助另外一個(gè)載體，連接后，擴(kuò)增RBS-B基因進(jìn)行第二次連接； 2、T7啟動(dòng)子共表達(dá)兩個(gè)基因沒問題。 3、共表達(dá)主要是做催化用的，做純化沒必要共表達(dá)吧。分開表達(dá)純化不是更好？ 如果確實(shí)像同時(shí)純化也行，在擴(kuò)增第二個(gè)基因的引物上加上his標(biāo)簽就行。 |
3樓2012-11-29 13:55:08
4樓2012-11-29 15:04:24
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