 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 11426 | 回復(fù): 13 | ||
shizishanshang至尊木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
|
[求助]
請(qǐng)問(wèn)His-tag（組氨酸標(biāo)簽）怎么加到我的蛋白上去？ 已有1人參與
|
|
|
大家好，我實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要做幾個(gè)抗體（這些是一抗），向老外咨詢(xún)制作過(guò)程，回信說(shuō) The best is to subclone the hydrophilic loop of A proteins or cytoplasmic region of B proteins, express in the E. coli with His-tag, purify the protein and send it for immunization in Rabbit or Rat or Mouse. 因?yàn)槲易龅氖莾纱箢?lèi)蛋白，姑且以A和B代替。 我看老外的意思是要我分別克隆一段特殊的序列（這個(gè)序列我知道，就是我的蛋白的其中一段），然后加上 His-tag（組氨酸標(biāo)簽）在E. coli 中表達(dá)，然后再提取純化蛋白后在兔子或老鼠中獲得抗體？ 這中間有個(gè)問(wèn)題，怎么加上 His-tag（組氨酸標(biāo)簽）？是直接設(shè)計(jì)引物引進(jìn) His-tag（組氨酸標(biāo)簽），還是按照有些人說(shuō)的轉(zhuǎn)到PET-30a這樣還有 His-tag（組氨酸標(biāo)簽）的載體上獲得？ 請(qǐng)問(wèn)有沒(méi)有同學(xué)做過(guò)加 His-tag（組氨酸標(biāo)簽）的實(shí)驗(yàn)啊，請(qǐng)指教啊！ [ Last edited by silicare on 2014-3-28 at 14:03 ] |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
26博士申請(qǐng)
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
268求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
302求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
311求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
被我言中：新模板不強(qiáng)調(diào)格式了，假專(zhuān)家開(kāi)始管格式了
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
303求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
考研求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085601專(zhuān)碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085601材料工程專(zhuān)碩求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專(zhuān)業(yè)（081702）315分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 加我一個(gè)又怎樣
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 組氨酸結(jié)合鎳柱問(wèn)題
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 如何去除C端標(biāo)簽
已經(jīng)有5人回復(fù)
- His tag結(jié)合問(wèn)題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- His tag真核細(xì)胞蛋白純化
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 請(qǐng)教pcDNA3.1上酶切位點(diǎn)的問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 急！500kD 蛋白western 求助
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 10%NaOH是怎么加的
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 請(qǐng)問(wèn)His-tag（組氨酸標(biāo)簽）怎么加到酶蛋白上？
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 蛋白前面有一個(gè)his-tag和sumo-tag,想去掉sumo-tag，只留下一個(gè)his-tag，該怎么做
已經(jīng)有5人回復(fù)
- His tag antibody如何選擇？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- GST 和 His Tag的選擇
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 帶HIS-tag標(biāo)簽蛋白過(guò)NI-NDA掛不上柱子
已經(jīng)有5人回復(fù)
- HIS標(biāo)簽的蛋白不掛柱，求助
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 關(guān)于pET32a的HIS標(biāo)簽
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 求his標(biāo)簽蛋白純化步驟
已經(jīng)有3人回復(fù)
- EST標(biāo)簽的這個(gè)“標(biāo)簽”指的是什么？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- His Tag融合蛋白純化
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 關(guān)于變性條件下his-tag重組融合蛋白不結(jié)合鎳柱以及部分結(jié)合鎳柱情況
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 為什么用胰蛋白酶消化細(xì)胞？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 怎樣在表達(dá)載體質(zhì)粒接上His tag標(biāo)簽
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】組氨酸標(biāo)記的蛋白表達(dá)活性問(wèn)題
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】酵母表達(dá)外源蛋白，His-tag降解怎么辦
已經(jīng)有5人回復(fù)
alarace
至尊木蟲(chóng) (知名作家)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 82 (初中生)
- 金幣: 20027.9
- 散金: 15172
- 紅花: 20
- 帖子: 9155
- 在線(xiàn): 2796.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1546961
- 注冊(cè): 2011-12-22
- 專(zhuān)業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
5樓2012-12-10 08:35:35
muchong5577
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 929.2
- 散金: 67
- 紅花: 3
- 帖子: 675
- 在線(xiàn): 136.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 703384
- 注冊(cè): 2009-02-18
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
shizishanshang: 金幣+5, ★★★很有幫助, 多謝，我研究載體圖譜后再交流啊 2012-12-10 13:56:58
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
shizishanshang: 金幣+5, ★★★很有幫助, 多謝，我研究載體圖譜后再交流啊 2012-12-10 13:56:58
|
6樓的方法不對(duì)。 pET系列的載體有些是專(zhuān)門(mén)能提供某些標(biāo)簽的融合表達(dá)，如pET30a，多克隆位點(diǎn)上從上到下分別有His-Tag、S-Tag、His-Tag。在每個(gè)這些標(biāo)簽的中間都有酶切位點(diǎn)，如果你表達(dá)的蛋白想帶上某個(gè)標(biāo)簽，你只要根據(jù)質(zhì)粒圖譜設(shè)計(jì)引物就行，不需要在引物上加所帶標(biāo)簽的序列，簡(jiǎn)而言之，就是利用載體本身的標(biāo)簽。比如，你想使用pET30a帶上His-Taq，你的上游引物可設(shè)計(jì)從5端有NdeI 的酶切位點(diǎn)，下游引物設(shè)計(jì)為S-Tag標(biāo)簽后，His-Tag標(biāo)簽前這段序列中有的酶切位點(diǎn)，不過(guò)建議還是采用XhoI ，因?yàn)檫@樣表達(dá)出蛋白最短。另外要注意的是，引物設(shè)計(jì)的時(shí)候要考慮到翻譯，不要造成移碼突變。 |
7樓2012-12-10 11:24:53
2樓2012-12-08 21:21:01
靜安jingan
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 86 (初中生)
- 貴賓: 0.932
- 金幣: 9295.7
- 散金: 2894
- 紅花: 43
- 沙發(fā): 28
- 帖子: 4233
- 在線(xiàn): 1412.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2005883
- 注冊(cè): 2012-09-16
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 免疫相關(guān)疾病其他科學(xué)問(wèn)題
3樓2012-12-09 11:15:12
shizishanshang
至尊木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 72 (初中生)
- 金幣: 10570.4
- 散金: 1393
- 紅花: 17
- 帖子: 3882
- 在線(xiàn): 1215.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 297159
- 注冊(cè): 2006-11-18
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 植物學(xué)
4樓2012-12-09 22:21:32
juanzi7229
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 656.5
- 帖子: 337
- 在線(xiàn): 110.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 556126
- 注冊(cè): 2008-05-10
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
6樓2012-12-10 10:12:45
zx1984
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 21 (小學(xué)生)
- 金幣: 7566.7
- 散金: 2765
- 紅花: 2
- 帖子: 434
- 在線(xiàn): 379.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1176692
- 注冊(cè): 2010-12-24
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 出血、凝血與血栓
8樓2012-12-10 13:15:02
zhonglin88
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 81.8
- 帖子: 15
- 在線(xiàn): 7.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2370485
- 注冊(cè): 2013-03-23
9樓2014-03-27 19:51:18
muchong5577
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 929.2
- 散金: 67
- 紅花: 3
- 帖子: 675
- 在線(xiàn): 136.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 703384
- 注冊(cè): 2009-02-18
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
10樓2014-03-28 13:54:56
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 shizishanshang 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +7 | 好運(yùn)連綿不絕 2026-03-12 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +5 | yy要上岸呀 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專(zhuān)碩306英一數(shù)二 +7 | z1z2z3879 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +8 | 小熊joy 2026-03-14 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料工程專(zhuān)碩調(diào)劑 +5 | 204818@lcx 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +4 | knight344 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工專(zhuān)碩調(diào)劑 +5 | heming3743 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 東南大學(xué)364求調(diào)劑 +5 | JasonYuiui 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 國(guó)自科面上基金字體 +6 | iwuli 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3 | 藥學(xué)chy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 現(xiàn)在如何回避去年的某一個(gè)專(zhuān)家，不知道名字 +3 | zk200107 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | 5201314Lsy！ 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +5 | 超級(jí)伊昂大王 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 土木第一志愿276求調(diào)劑，科研和技能十分豐富，求新興方向的導(dǎo)師收留 +3 | 土木小天才 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 309分請(qǐng)求調(diào)劑 +7 | dtdxzxx 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 化工學(xué)碩306求調(diào)劑 +9 | 42838695 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考博] 福州大學(xué)楊黃浩課題組招收2026年專(zhuān)業(yè)學(xué)位博士研究生，2026.03.20截止 +3 | Xiangyu_ou 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-12 | 4/200 |
|