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shizishanshang至尊木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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[求助]
請(qǐng)問(wèn)His-tag（組氨酸標(biāo)簽）怎么加到我的蛋白上去？ 已有1人參與
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大家好，我實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要做幾個(gè)抗體（這些是一抗），向老外咨詢(xún)制作過(guò)程，回信說(shuō) The best is to subclone the hydrophilic loop of A proteins or cytoplasmic region of B proteins, express in the E. coli with His-tag, purify the protein and send it for immunization in Rabbit or Rat or Mouse. 因?yàn)槲易龅氖莾纱箢?lèi)蛋白，姑且以A和B代替。 我看老外的意思是要我分別克隆一段特殊的序列（這個(gè)序列我知道，就是我的蛋白的其中一段），然后加上 His-tag（組氨酸標(biāo)簽）在E. coli 中表達(dá)，然后再提取純化蛋白后在兔子或老鼠中獲得抗體？ 這中間有個(gè)問(wèn)題，怎么加上 His-tag（組氨酸標(biāo)簽）？是直接設(shè)計(jì)引物引進(jìn) His-tag（組氨酸標(biāo)簽），還是按照有些人說(shuō)的轉(zhuǎn)到PET-30a這樣還有 His-tag（組氨酸標(biāo)簽）的載體上獲得？ 請(qǐng)問(wèn)有沒(méi)有同學(xué)做過(guò)加 His-tag（組氨酸標(biāo)簽）的實(shí)驗(yàn)啊，請(qǐng)指教��！ [ Last edited by silicare on 2014-3-28 at 14:03 ] |
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