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挑戰(zhàn)者001銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
如何硫酸銨的沉淀的濃度啊
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| 我想將發(fā)酵液中的蛋白酶提取出來(lái)，此前師兄做的此酶的等電點(diǎn)為5.75，最適溫度為40℃，最適pH為7.0，Ca2+對(duì)酶活有較為明顯的提高， Fe2+、Co2+、Ni2+對(duì)酶活有降低的作用。 我不知如何設(shè)計(jì)硫酸銨的分級(jí)沉淀，如何確定最適硫酸銨濃度？？以及注意事項(xiàng)？？ 謝謝。新手十分感激不盡。 |
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virty76
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2樓2012-12-22 08:45:28
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
挑戰(zhàn)者001: 金幣+5 2012-12-22 18:50:46
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硫酸銨分級(jí)沉淀：將粗酶液在冰浴條件下緩慢加入固體硫酸銨至飽和度20%。4 ℃下靜置30 min，離心收集沉淀，用少量緩沖液溶解。接著以每間隔10%的飽和度往上清液中加入固體硫酸銨，4 ℃下靜置30 min后離心收集沉淀，用少量緩沖液溶解，即得到酶蛋白鹽析液。重復(fù)上述步驟。直至硫酸銨飽和度加至80%。測(cè)定各飽和度階段所沉淀的蛋白質(zhì)含量和蛋白酶活性，并計(jì)算比活力 一般蛋白在10%飽和度下極少會(huì)析出，所以直接將飽和度增至20% |
3樓2012-12-22 15:17:33
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