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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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18853850850

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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[求助] 關(guān)于原核表達(dá)

最近在用BL21表達(dá)一個(gè)蛋白，這個(gè)蛋白有100多KD,表達(dá)量比較低，大量誘導(dǎo)之后用含8M 尿素的Buffer溶解，蛋白量很少，我要純化這個(gè)蛋白做檢測(cè)用，需要一定的蛋白量，純化過(guò)一次最后接下來(lái)的東西什么都沒(méi)有，怎么回事啊，請(qǐng)教一下哪位高手能指點(diǎn)指點(diǎn)。

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1樓 2013-01-04 10:00:54

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zhang881007

金蟲(chóng) (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

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你的分子量大，應(yīng)該有包涵體吧。如果直接電泳的話含量如何？8M尿素復(fù)性會(huì)非常困難，建議實(shí)用其他的復(fù)性條件

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shine

3樓2013-01-04 15:39:14

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cicelyzh

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【答案】應(yīng)助回帖

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你是指誘導(dǎo)條件下本身蛋白就少，還是說(shuō)復(fù)性率低？用尿素復(fù)性本身有些時(shí)候就比較麻煩，復(fù)性出來(lái)的蛋白未必與體內(nèi)活性形式一樣。如果需要活性蛋白，優(yōu)化條件有時(shí)候能達(dá)到不錯(cuò)的可溶蛋白量，接下來(lái)的工作反而輕松。

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2樓2013-01-04 11:08:40

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引用回帖:

2樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-04 11:08:40
你是指誘導(dǎo)條件下本身蛋白就少，還是說(shuō)復(fù)性率低？用尿素復(fù)性本身有些時(shí)候就比較麻煩，復(fù)性出來(lái)的蛋白未必與體內(nèi)活性形式一樣。如果需要活性蛋白，優(yōu)化條件有時(shí)候能達(dá)到不錯(cuò)的可溶蛋白量，接下來(lái)的工作反而輕松。

蛋白本身表達(dá)的不多，用尿素溶解看不到被濃縮了；蛋白有沒(méi)有活性不重要，只想拿到純的蛋白就行。

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學(xué)自己想知道的

4樓2013-01-05 12:10:58

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引用回帖:

3樓: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-04 15:39:14
你的分子量大，應(yīng)該有包涵體吧。如果直接電泳的話含量如何？8M尿素復(fù)性會(huì)非常困難，建議實(shí)用其他的復(fù)性條件

直接電泳看不到明顯的條帶

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學(xué)自己想知道的

5樓2013-01-05 12:11:35

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