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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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nalanyuhang

新蟲 (初入文壇)

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專業(yè): 腫瘤病因

[求助] western blot p-erk

最近實(shí)驗(yàn)要做western blot 測erk、p-erk加藥后含量變化。
實(shí)驗(yàn)室用的RIPA裂解液配方為：50mM Tris-HCl、150mM NaCl、1mMEDTA、1% TritonX-100、1%脫氧膽酸鈉、0.1% SDS。蛋白酶抑制劑用的是PMSF，現(xiàn)在想問一下有沒有做過類似實(shí)驗(yàn)的幫我看一下配方能提出我想要的蛋白嗎？是不是還應(yīng)該加磷酸酶抑制劑？是的話應(yīng)該加什么物質(zhì)，濃度是多少？還有就是我是western新手，測磷酸化蛋白有沒有什么注意事項(xiàng)啊，希望有做過的戰(zhàn)友幫忙分享點(diǎn)寶貴經(jīng)驗(yàn)，感激不盡！

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原創(chuàng)首發(fā)：Tips for Western Blot-一些小技巧而已已經(jīng)有13人回復(fù)

孝文要加油

1樓 2013-01-10 18:05:32

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porphybaby

金蟲 (正式寫手)

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

PMSF可能不足以抑制所有蛋白酶的活性。

建議你去買一個(gè)羅氏的產(chǎn)品叫 Roche complete，Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free. 具體什么名字我忘了。
它是一種混合片劑，可以溶在裂解中，抑制多種蛋白酶的活性。

好像現(xiàn)在出了一款升級(jí)版，里頭就加了磷酸酶抑制劑的。但這種cocktail 藥片比較貴，你可以問問那些代理公司有沒有散裝的賣。

然后你注意在樣品處理的時(shí)候要冰浴，一定要在冰上進(jìn)行，保持低溫。還有

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2013-01-10 18:50:39

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