 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2479 | 回復(fù): 19 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
克隆做不出來，求幫助
|
||
|
做克隆一個月了，始終有兩個做不出來。都是大約2000bp的長度。 1.載體：pFASTbac-gp67 感受態(tài)：DH5a 用BamHI和XhoI雙酶切 酶切37度，4小時 連接有時候過夜連，菌落很少，而且菌液pcr P不出來。 2.載體：pFASTbac-Hem 感受態(tài)：DH5a 用BglII和XhoI雙酶切 酶切37度，4小時 連接有時候過夜連，菌落很少，而且菌液pcr P不出來 酶切體系：回收片段43ul 酶1.2各1ul buffer 5ul BSA 0.5ul 連接體系：回收酶切產(chǎn)物 12ul T4連接酶1ul buffer 1.5ul 載體 0.5ul |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有198人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 請教一下，這是否為假陽性克隆的問題，如果是，該如何提高陽性克隆效率？
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 酶切酶連轉(zhuǎn)化后單克隆檢測不對
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 如何根據(jù)保守序列將基因片段克隆出來
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 挑單克隆后，菌液PCR檢測所有條帶都偏小，目的條帶沒有出現(xiàn)
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 求助：亞克隆做不出來
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 構(gòu)建克隆載體時出現(xiàn)的問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 平末端連接做不出來克隆
已經(jīng)有30人回復(fù)
- overlap PCR做不出來吶。。。。
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 克隆過程出現(xiàn)的問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- PCR高手請進，小女子有事相求，我剛來金幣不要嫌少啊，我只有這么多啊，全給你了
已經(jīng)有20人回復(fù)
- TA克隆遇到的問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- DNA測序求助
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】基因功能驗證
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】怎么做都提不出DNA，請高手幫一下忙嘍�。。�！
已經(jīng)有52人回復(fù)
- 【求助/交流】為什么我的PCR產(chǎn)物總是連接不上T載體
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 【求助/交流】WB老做不出來
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】急！克隆快做了一個月了，就是做不出來
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 【求助/交流】基因克隆時，酶切有結(jié)果，PCR卻P不出來
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】5'Race反復(fù)做不出來，該怎么辦
已經(jīng)有74人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR產(chǎn)物切膠回收后可不可以加A尾,做TA克隆，急！希望高手們能幫幫忙！
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】TA克隆為什么會長出藍斑
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】長片段的連接轉(zhuǎn)化
已經(jīng)有9人回復(fù)
10樓2013-01-24 17:26:24
raindick1231
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 93.3
- 帖子: 83
- 在線: 26.5小時
- 蟲號: 649284
- 注冊: 2008-11-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物學研究的新技術(shù)、新方
2樓2013-01-23 19:56:24
raindick1231
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 93.3
- 帖子: 83
- 在線: 26.5小時
- 蟲號: 649284
- 注冊: 2008-11-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物學研究的新技術(shù)、新方
3樓2013-01-23 20:08:21
酶切專家
金蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 96 (初中生)
- 金幣: 1610.8
- 紅花: 4
- 帖子: 149
- 在線: 41.3小時
- 蟲號: 1648414
- 注冊: 2012-02-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 果然是專家 2013-01-29 08:35:44
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 果然是專家 2013-01-29 08:35:44
|
克隆時一般需要設(shè)置一個載體自連對照，用于分析載體本身是否酶切完全。 還需要明確感受態(tài)細胞是否正常。 如果載體或外源片段酶切不完全，也會導致克隆失敗，建議你用double digestion designer設(shè)計雙酶切，以確保載體和你的目的基因片段酶切完全，提高克隆效率，減少假陽性背景克隆。 如果都正常，那就要考慮是否克隆的基因?qū)Υ竽c桿菌有毒性（基因水平或蛋白質(zhì)水平）。由于毒性的原因，對導致很多基因在原核表達載體上克隆不成功。 祝好運！ |
4樓2013-01-23 22:01:09
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
 一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。
+11
|
nnnnnnn5 2026-03-25 | 11/550 |
|
|
|
[基金申請] 面上5B能上會嗎？ +4 | redcom 2026-03-29 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +5 | Y-cap 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料學碩333求調(diào)劑 +11 | 北道巷 2026-03-24 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 330分求調(diào)劑 +5 | qzenlc 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 初試270分 求調(diào)劑 +8 | 谷雨上岸 2026-03-23 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +5 | 愛羈絆 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿華北電力大學能動專碩，293，求調(diào)劑 +3 | 15537177284 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中南大學化學0703總分337求調(diào)劑 +5 | niko- 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學324求調(diào)劑 +7 | hanamiko 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大085600，310分求調(diào)劑 +5 | 李瀟可 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑。有半年電池和半年高分子實習經(jīng)歷 +10 | 材料學257求調(diào)劑 2026-03-23 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 342求調(diào)劑 +3 | 加油a李zs 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +7 | 青檸檬1 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 打過很多競賽，085406控制工程300分，求調(diào)劑 +3 | askeladz 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 07化學303求調(diào)劑 +5 | 睿08 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研一志愿蘇州大學初始315（英一）求調(diào)劑 +3 | sbdksD 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +3 | AZMK 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化工專碩求調(diào)劑 +3 | question挽風 2026-03-24 | 3/150 |
|