a83875785

BioEPI: 1
應(yīng)助: 8 (幼兒園)
金幣: 3243.4
散金: 6062
紅花: 3
帖子: 1344
在線: 419.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 569374
注冊(cè): 2008-06-05
專(zhuān)業(yè): 抗腫瘤藥物藥理

[求助] western問(wèn)題求救！！！

western轉(zhuǎn)膜后，100V,1h20min，轉(zhuǎn)膜時(shí)，溫度很高，聽(tīng)見(jiàn)周?chē)谋诨穆曇�，電流一開(kāi)始就300mA，最后貌似升到1000多mA，也不知道是哪里出錯(cuò)了導(dǎo)致這么發(fā)熱，轉(zhuǎn)膜液最后變成黃色（見(jiàn)圖），膠也變黃了，但膜上的marker很明顯（見(jiàn)圖），我用TBST洗了膜2次，每次5min，聽(tīng)說(shuō)蛋白在高溫下會(huì)降解，請(qǐng)問(wèn)還有做下去的必要嗎？那么出現(xiàn)這個(gè)是什么原因？

Camera360_20130204092605.jpg

Camera360_20130204092852-1.jpg

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

0856材料化工調(diào)劑總分330 已經(jīng)有9人回復(fù)
085602 化工專(zhuān)碩 338分求調(diào)劑已經(jīng)有9人回復(fù)
352分化工與材料已經(jīng)有4人回復(fù)
求調(diào)劑已經(jīng)有8人回復(fù)
材料求調(diào)劑一志愿哈工大總分298分，前三科223分已經(jīng)有3人回復(fù)
材料求調(diào)劑一志愿哈工大324 已經(jīng)有4人回復(fù)
085600 286分材料求調(diào)劑已經(jīng)有4人回復(fù)
求調(diào)劑已經(jīng)有7人回復(fù)
275求調(diào)劑已經(jīng)有10人回復(fù)
286求調(diào)劑已經(jīng)有6人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

western blot 半干式電轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)不上問(wèn)題��！快來(lái)幫幫忙�。。� 已經(jīng)有13人回復(fù)
求助：western blotting一抗有關(guān)問(wèn)題已經(jīng)有10人回復(fù)
QTL定位和遺傳圖譜問(wèn)題關(guān)于F1代自交不純的問(wèn)題求救�。。。。�！已經(jīng)有13人回復(fù)
western blot 背景深淺問(wèn)題，請(qǐng)大家指教下啊已經(jīng)有6人回復(fù)
關(guān)于western blot的小問(wèn)題已經(jīng)有12人回復(fù)
western blot中蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印問(wèn)題已經(jīng)有17人回復(fù)
western轉(zhuǎn)膜問(wèn)題已經(jīng)有8人回復(fù)
日立F4600改裝問(wèn)題求救已經(jīng)有6人回復(fù)
western抗體問(wèn)題已經(jīng)有7人回復(fù)
western樣品處理問(wèn)題已經(jīng)有5人回復(fù)
western blot時(shí)marker問(wèn)題求助已經(jīng)有18人回復(fù)
western和PCR選擇問(wèn)題已經(jīng)有7人回復(fù)
求助Western-bot轉(zhuǎn)膜問(wèn)題已經(jīng)有25人回復(fù)
Western Blot電泳蛋白質(zhì)外漏問(wèn)題求助已經(jīng)有22人回復(fù)
【求助/交流】western實(shí)驗(yàn)時(shí)加一抗的問(wèn)題已經(jīng)有16人回復(fù)
【分享】新手上路 Western blot問(wèn)題集合已經(jīng)有6人回復(fù)
【求助/交流】western 曝光問(wèn)題已經(jīng)有20人回復(fù)
【求助】關(guān)于神經(jīng)元的western所遇到的問(wèn)題已經(jīng)有20人回復(fù)
【求助/交流】western blot求救(已更新）已經(jīng)有19人回復(fù)
【求助】MS建模導(dǎo)入lammps問(wèn)題求救已經(jīng)有14人回復(fù)
【求助/交流】有關(guān)western blotting的求救已經(jīng)有9人回復(fù)
Western Blot 磷酸化蛋白測(cè)定問(wèn)題已經(jīng)有9人回復(fù)
western Blotting 的問(wèn)題已經(jīng)有5人回復(fù)

1樓 2013-02-04 09:34:51

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

cicelyzh

鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)

BioEPI: 4
應(yīng)助: 1662 (講師)
金幣: 8693.8
紅花: 72
帖子: 3516
在線: 456小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1614001
注冊(cè): 2012-02-13
專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+1, 謝謝參與 2013-02-06 07:34:45

照片上感覺(jué)是挺夸張的。你可以用麗春紅染一下膜看看。如果還可以就繼續(xù)做。

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2013-02-05 07:26:32

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

遙控器68

金蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 17 (小學(xué)生)
金幣: 900.2
散金: 50
紅花: 2
帖子: 197
在線: 41.4小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1958999
注冊(cè): 2012-08-27
性別: MM
專(zhuān)業(yè): 植物生理與生化

【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+1, 謝謝參與 2013-02-06 07:35:29

嚴(yán)重懷疑問(wèn)題出在你的電泳槽身上，電流也太大了，會(huì)不會(huì)燒到什么東西了？
緩沖液顏色不正常，你洗槽的時(shí)候是不是直接把導(dǎo)電的部分一起弄到水里了？因?yàn)榈谝谎劬陀锌吹借F銹的趕腳……

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2013-02-05 10:18:11

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

a83875785

鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

BioEPI: 1
應(yīng)助: 8 (幼兒園)
金幣: 3243.4
散金: 6062
紅花: 3
帖子: 1344
在線: 419.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 569374
注冊(cè): 2008-06-05
專(zhuān)業(yè): 抗腫瘤藥物藥理

引用回帖:

2樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-05 08:26:32
照片上感覺(jué)是挺夸張的。你可以用麗春紅染一下膜看看。如果還可以就繼續(xù)做。

做完了還顯色了一張膜大概廢了一半吧沒(méi)有全部廢掉底下的小蛋白能檢測(cè)到上面大蛋白貌似都降解了

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2013-02-05 19:44:38

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

a83875785

鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

BioEPI: 1
應(yīng)助: 8 (幼兒園)
金幣: 3243.4
散金: 6062
紅花: 3
帖子: 1344
在線: 419.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 569374
注冊(cè): 2008-06-05
專(zhuān)業(yè): 抗腫瘤藥物藥理

引用回帖:

3樓: Originally posted by 遙控器68 at 2013-02-05 11:18:11
嚴(yán)重懷疑問(wèn)題出在你的電泳槽身上，電流也太大了，會(huì)不會(huì)燒到什么東西了？
緩沖液顏色不正常，你洗槽的時(shí)候是不是直接把導(dǎo)電的部分一起弄到水里了？因?yàn)榈谝谎劬陀锌吹借F銹的趕腳……

洗槽的時(shí)候那個(gè)一黑一紅的轉(zhuǎn)膜槽是直接放水龍頭下沖的

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2013-02-05 19:45:32

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

晴天1882

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 19 (小學(xué)生)
金幣: 4077.5
散金: 18
紅花: 5
沙發(fā): 1
帖子: 647
在線: 424.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 744363
注冊(cè): 2009-04-09
性別: MM
專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+1, 謝謝參與 2013-02-06 07:35:40

好恐怖��！從沒(méi)遇到這種情況，我電流最大也就250ma，兩個(gè)半小時(shí)，轉(zhuǎn)170KD左右的蛋白，你是多大的蛋白？怎么那么大電流，對(duì)儀器也不好�。「杏X(jué)都要短路了似的，溫度這么高，大蛋白或許真的降解了。

贊一下

回復(fù)此樓

人有絕交，才有至交！

6樓2013-02-05 23:45:30

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

snailtt

捐助貴賓 (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
貴賓: 0.1
金幣: 2603.1
散金: 66
紅花: 5
帖子: 176
在線: 137小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1164012
注冊(cè): 2010-12-06
專(zhuān)業(yè): 抗腫瘤藥物藥理

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

好恐怖，下回用橫流300mA吧，這次的不行就算了，就算出了結(jié)果你敢用嗎
另電轉(zhuǎn)液全部倒掉重配看看

贊一下

回復(fù)此樓

7樓2013-02-06 17:46:48

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

david0308

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

BioEPI: 1
應(yīng)助: 17 (小學(xué)生)
金幣: 4068.1
散金: 58
紅花: 5
帖子: 708
在線: 388.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1603917
注冊(cè): 2012-02-07
性別: GG
專(zhuān)業(yè): 神經(jīng)生物學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
wizardfan: 金幣+2, 謝謝參與 2013-02-14 05:42:15

樓主的轉(zhuǎn)膜槽子檢查過(guò)了么？怎么看描述像是電源短路……

[ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ]

贊一下

回復(fù)此樓

哈哈

8樓2013-02-14 01:09:05

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

robustli

銀蟲(chóng) (小有名氣)

BioEPI: 1
應(yīng)助: 62 (初中生)
金幣: 427.1
散金: 40
紅花: 3
帖子: 126
在線: 72.4小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2251936
注冊(cè): 2013-01-20
性別: GG
專(zhuān)業(yè): 免疫遺傳學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

我的濕轉(zhuǎn)方法，80V，45min，即使是440KD的蛋白都能轉(zhuǎn)過(guò)去。

贊一下

回復(fù)此樓

immunologyparasite

9樓2013-02-16 01:54:42

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

neuralcrest

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 19 (小學(xué)生)
金幣: 609.5
散金: 928
紅花: 5
帖子: 923
在線: 353.6小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1668292
注冊(cè): 2012-03-06
性別: GG
專(zhuān)業(yè): 細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)與分化

【答案】應(yīng)助回帖

1 check your transfer buffer(1X?);
2 check your machine.
3 from the marker ,it seems you can keep going.

贊一下

回復(fù)此樓

有朋自網(wǎng)上來(lái)不亦樂(lè)乎

10樓2013-02-17 19:44:31

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[有機(jī)交流] 高溫高壓反應(yīng)求助 10+4	chibby 2026-03-25	4/200	2026-03-27 21:08 by BT20230424
[考博] 26申博 +3	加油沖啊！ 2026-03-26	3/150	2026-03-27 15:38 by cls512
[考研] 279 分求調(diào)劑 +4	睡個(gè)好覺(jué)_16 2026-03-24	4/200	2026-03-27 15:05 by 醉在風(fēng)里
[考研] 一志愿華東理工大學(xué)081700，初試分?jǐn)?shù)271 +6	kotoko_ik 2026-03-23	7/350	2026-03-27 12:29 by 惠州彭于晏
[論文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3	Russ_ss 2026-03-25	5/250	2026-03-27 10:49 by 陸小果畫(huà)大餅
[考研] 求調(diào)劑一志愿本科北科大化學(xué) 343 +6	13831862839 2026-03-24	7/350	2026-03-26 22:57 by 不吃魚(yú)的貓
[考研] 求調(diào)劑 +8	Auroracx 2026-03-22	8/400	2026-03-26 19:55 by 不吃魚(yú)的貓
[考研] 尋找調(diào)劑 +5	倔強(qiáng)芒? 2026-03-21	8/400	2026-03-26 13:25 by 0906ljy
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求調(diào)劑 +4	gdlf9999 2026-03-24	4/200	2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑，求導(dǎo)師收 +7	天天好運(yùn)來(lái)上岸?/a> 2026-03-24	7/350	2026-03-24 20:26 by peike
[考研] 化工專(zhuān)碩求調(diào)劑 +3	question挽風(fēng) 2026-03-24	3/150	2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[基金申請(qǐng)] 請(qǐng)教下大家 2026年國(guó)家基金申請(qǐng)是雙盲審嗎？ +3	lishucheng1 2026-03-22	5/250	2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 求調(diào)劑 +7	十三加油 2026-03-21	7/350	2026-03-23 23:48 by 熱情沙漠
[考研] 361求調(diào)劑 +3	Glack 2026-03-22	3/150	2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 328求調(diào)劑 +4	LHHL66 2026-03-23	4/200	2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 一志愿東華大學(xué)化學(xué)070300，求調(diào)劑 +7	2117205181 2026-03-21	8/400	2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 求調(diào)劑一志愿海大，0703化學(xué)學(xué)碩304分，有大創(chuàng)項(xiàng)目，四級(jí)已過(guò) +6	幸運(yùn)哩哩 2026-03-22	10/500	2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 306求調(diào)劑 +5	來(lái)好運(yùn)來(lái)來(lái)來(lái) 2026-03-22	5/250	2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)071000，求調(diào)劑 +4	沿岸有貝殼6 2026-03-21	4/200	2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 求助 +5	夢(mèng)里的無(wú)言 2026-03-21	6/300	2026-03-21 17:51 by 學(xué)員8dgXkO