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[求助] western問題求救�。�！

western轉(zhuǎn)膜后，100V,1h20min，轉(zhuǎn)膜時，溫度很高，聽見周圍的冰融化的聲音，電流一開始就300mA，最后貌似升到1000多mA，也不知道是哪里出錯了導(dǎo)致這么發(fā)熱，轉(zhuǎn)膜液最后變成黃色（見圖），膠也變黃了，但膜上的marker很明顯（見圖），我用TBST洗了膜2次，每次5min，聽說蛋白在高溫下會降解，請問還有做下去的必要嗎？那么出現(xiàn)這個是什么原因？

Camera360_20130204092605.jpg

Camera360_20130204092852-1.jpg

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1樓 2013-02-04 09:34:51

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cicelyzh

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照片上感覺是挺夸張的。你可以用麗春紅染一下膜看看。如果還可以就繼續(xù)做。

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2樓2013-02-05 07:26:32

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遙控器68

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嚴(yán)重懷疑問題出在你的電泳槽身上，電流也太大了，會不會燒到什么東西了？
緩沖液顏色不正常，你洗槽的時候是不是直接把導(dǎo)電的部分一起弄到水里了？因為第一眼就有看到鐵銹的趕腳……

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3樓2013-02-05 10:18:11

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a83875785

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2樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-05 08:26:32
照片上感覺是挺夸張的。你可以用麗春紅染一下膜看看。如果還可以就繼續(xù)做。

做完了還顯色了一張膜大概廢了一半吧沒有全部廢掉底下的小蛋白能檢測到上面大蛋白貌似都降解了

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4樓2013-02-05 19:44:38

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引用回帖:

3樓: Originally posted by 遙控器68 at 2013-02-05 11:18:11
嚴(yán)重懷疑問題出在你的電泳槽身上，電流也太大了，會不會燒到什么東西了？
緩沖液顏色不正常，你洗槽的時候是不是直接把導(dǎo)電的部分一起弄到水里了？因為第一眼就有看到鐵銹的趕腳……

洗槽的時候那個一黑一紅的轉(zhuǎn)膜槽是直接放水龍頭下沖的

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5樓2013-02-05 19:45:32

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好恐怖啊！從沒遇到這種情況，我電流最大也就250ma，兩個半小時，轉(zhuǎn)170KD左右的蛋白，你是多大的蛋白？怎么那么大電流，對儀器也不好�。「杏X都要短路了似的，溫度這么高，大蛋白或許真的降解了。

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人有絕交，才有至交！

6樓2013-02-05 23:45:30

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snailtt

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好恐怖，下回用橫流300mA吧，這次的不行就算了，就算出了結(jié)果你敢用嗎
另電轉(zhuǎn)液全部倒掉重配看看

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7樓2013-02-06 17:46:48

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david0308

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wizardfan: 金幣+2, 謝謝參與 2013-02-14 05:42:15

樓主的轉(zhuǎn)膜槽子檢查過了么？怎么看描述像是電源短路……

[ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ]

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哈哈

8樓2013-02-14 01:09:05

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robustli

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我的濕轉(zhuǎn)方法，80V，45min，即使是440KD的蛋白都能轉(zhuǎn)過去。

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immunologyparasite

9樓2013-02-16 01:54:42

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1 check your transfer buffer(1X?);
2 check your machine.
3 from the marker ,it seems you can keep going.

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有朋自網(wǎng)上來不亦樂乎

10樓2013-02-17 19:44:31

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